Визначення інгібуючих речовин з резазуріном
У чисті пробірки наливають по 10 см3 досліджуваного молока і закривають стерильними гумовими пробками. Одночасно проводять контрольний аналіз: в пробірку наливають 10 см3 відновленого сухого препарату для контролю інбуючих речовин (СКИВ).
Пробірки з досліджуваним молоком і контрольною пробою нагрівають на водяній бані до 85-87 ºС, витримують 10 хв. і охолоджують до 46-48 ºС. Після цього в пробірки вносять робочу тест-культуру.
Вміст пробірок перемішують 3-кратним перевертанням і витримують протягом 1 год. 15 хв. при температурі 43-45 ºС в редуктазнику або на водяній бані. В пробірки з досліджуваним молоком вносять 1 см3 основного розчину резазуріну з температурою 20 ºС, перемішують шляхом 2-кратного перевертання і витримують при температурі 45-47 ºС протягом 10 хв., після чого проводять оцінку.
При відсутності інгібіторів вміст пробірок буде мати рожевий або білий колір. При наявності у молоці інгібіторів забарвлення вмісту пробірок буде синьо-сірим, синьо-фіолетовим або фіолетовим (див. дод. Б).
Визначення інгібуючих речовин з метиленовим синім
Пробірки з 10 см3 досліджуваного молока, не щільно закриті гумовими пробками, нагрівають на водяній бані до температури 85-89 ºС, витримують при цій температурі 10 хв. і охолоджують до 41-45 ºС. Потім в пробірки вносять по 2 см3 приготовленої для проведення аналізу суміші, яка складається з водного розчину пептону, однодобової культури термофільного стрептококу і водного розчину метиленового голубого. Суміш перемішують шляхом 3-кратного перевертання і витримують на водяній бані при температурі 41-42 ºС протягом 2 год. Якщо інгібуючі речовини відсутні в досліджуваному молоці, то вміст пробірок буде мати білий колір, якщо наявні – колір буде голубим. Поява голубого кільця висотою 1 см3 на поверхні молока не враховується.
|
|
|
2.5. Визначення антибіотиків у молоціведуть
- чашковим методом (з тест-культурою Bac. stearothermophilus);
- тестовим методом з використанням:
● ферментативних експрес-тестів Beta-star, Penzym (тривалість аналізу 5-8 хв.)
● мікробіальних тестів для визначення широкого спектру антибіотиків і сульфаніламідів Сopan Test, BRTTest та інших (тривалість аналізу 2,0-2,5 год.).
2.5.1. Визначення антибіотиків у молоці чашковим методом з тест-культурою Bac. stearothermophilus
Метод оснований на здатності антибіотиків, які містяться у молоці, проникати в агарове середовище зі спорами тест-мікроба і перешкоджати його росту. Утворення прозорих зон інгібування на чашці Петрі свідчить про присутність у досліджуваній пробі антибіотиків.
Цей метод достатньо складний і трудомісткий, займає багато часу, тому рідко використовується у промисловості. Йому на зміну прийшли тестові методи, які зручні та прості у використанні і мають високу чутливість.
|
|
|
Визначення антибіотиків і сульфаніламідів у молоці за допомогою copan test
Принцип дії CopanTestполягає у затримці росту в агаровому середовищі (при наявності залишків антимікробних речовин у зразку) чутливого до багатьох антибіотиків і сульфаніламідів штаму спороутворюючої бактерії, природного комерсалу Bacillus stearothermophilus.
Після внесення до тестової ампули (мікропластини) одноразовою піпеткою-дозатором 0,1 мл молока проводять інкубацію при температурі 64 ± 1 ˚С протягом 3 годин ±15 хв., після чого оцінюють результати тестування шляхом візуального огляду тестових ампул. Для інтерпретації позитивності або негативності результатів тестування використовують кольорову діаграму, що додається до тест-набору (див.рис. 4 ідод. Д).
Рис.4. Кольорова діаграма для інтерпретації результатів аналізу
Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 467; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!