Метод определения молочнокислых микроорганизмов (ГОСТ 10444.11-75)
Сущность метода заключается в способности молочнокислых бактерий образовывать молочную кислоту и давать вокруг колоний на агаризованной среде с углекислым кальцием «зоны просветления» или изменять цвет индикатора при развитии в жидкой среде.
Для определения молочнокислых бактерий из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведении по ГОСТ 26669.
1 см3 пробы продукта помещают параллельно в две чашки Петри с 30 см3 из разведённого капустного агара.
Посевы термостатируют при 30±0,5°С до появления видимого роста, но не более 5 суток.
Появление зон растворения мела вокруг колоний на капустном агаре является одним из признаков присутствия молочнокислых бактерий в посевах.
Молочнокислые бактерии образуют на агаризованных средах мелкие гладкие или шероховатые колонии, обычно медленно растущие в глубине или реже на поверхности среды; некоторые молочнокислые бактерии могут образовывать на поверхности слизистые колонии. При развитии молочнокислых бактерий, образующих газ, наблюдаются разрывы агаризованной среды.
Принадлежность выросших культур к молочнокислым бактериям определяют по характерным признакам, выявляемым при микроскопировании, и по результатам пробы на каталазу (ГОСТ Р 51446).
При микроскопировании устанавливают подвижность клеток, морфологию, отношение к окраске по Граму (ГОСТ Р 51446) и отсутствие спорообразования.
|
|
|
Молочнокислые бактерии, кокки или палочки, обычно неподвижны, не образуют спор, грамположительны.
Молочнокислые бактерии каталазы не образуют.
При отсутствии роста молочнокислых бактерий в посевах пробы указывают на отсутствие этой группы микроорганизмов в продукте.
Определение бактерий рода Proteus (ГОСТ 28560-90, Инструкция по санитарно-микробиологическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных № 5319-91)
Метод основан на способности бактерий рода Proteus расти на питательных средах в виде ползучего вуалеобразного опалесцирующего налёта с образованием гнилостного запаха.
Из продукта и (или) соответствующих разведений высевают по 1 см3 в рыбопептонный бульон, посевы инкубируют при (36±1)°С, в течение 48 ч. Положительными считаются пробирки, в которых наблюдается помутнение среды.
Для определения бактерий рода Proteus две капли из рыбопептонного бульона вносят в конденсационную воду свежескошенного рыбопептонного агара, не касаясь поверхности среды, засеянные пробирки инкубируют при (36±1)°С, через 18-24 ч просматривают, обращая внимание на образование ползучего вверх вуалеобразного налёта с голубоватым оттенком, неприятным гнилостным запахом.
|
|
|
Для подтверждения принадлежности выросших колоний к бактериям рода Proteus делают пересев методом укола и штрихом по поверхности трёхсахарного агара. Посевы инкубируют 48 ч (36±1)°С. При образовании сероводорода столбик среды чернеет, появляется газ, что указывает на ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа.
Допускается инкубирование посевов при отсутствии сероводорода через 48 ч продолжать до 4 сут, т.к. Р.myxofaciens может образовывать сероводород на 3-4-е сутки. Бактерии родов Morganellа и Providencia сероводорода не образуют.
Окрашивание по Граму (ГОСТ Р 51446-99)
Это окрашивание бактериальных клеток позволяет описать морфологию бактерии и классифицировать их на две группы на основании способности образовывать в условиях испытания фиолетовое окрашивание с кристаллическим фиолетовым. Это разделение является следствием различий в структуре клеточных стенок двух групп и коррелирует с другими основными различиями между этими группами.
Техника окрашивания. После фиксации на предметном стекле бактериальной пленки из 18-24-часовой культуры заливают пленку раствором кристаллического фиолетового и оставляют на одну минуту для протекания реакции. Стекло промывают несколько секунд водой. На стекло наносят на 1 мин раствор Люголя, а затем промывают этанолом (95%) не более 30 секунд до прекращения вымывания фиолетового красителя. Стекло промывают водой для удаления этанола и докрашивают препарат раствором фуксина в течение 1 мин, после чего снова промывают водой и высушивают.
|
|
|
Препарат просматривают под микроскопом, используя для этого светосильный объектив с масляной иммерсией. Бактериальные клетки, окрашенные в синий или фиолетовый цвет, относят к грамположительным (Грам+), окрашенные в цвета от темно-розового до красного - к грамотрицательным (Грам ―).
Задание:
1. Ознакомьтесь с перечисленными микробиологическими методами исследования.
2. Начертите микробиологические схемы определения каждой группы микроорганизмов в соответствии с ГОСТами, с указанием питательных сред, условий культивирования, характерных признаков роста, биохимических тестов, морфологических признаков.
Материалы: ГОСТ 10444.15, ГОСТ 30518, ГОСТ 10444.2, ГОСТ 29185, ГОСТ 28566, ГОСТ 10444.12, "МУ по контролю в рыбной продукции парагемолитических вибрионов - возбудителей пищевых токсикоинфекций", ГОСТ 30519, ГОСТ 28560, ГОСТ 10444.11.
Контрольные вопросы
1. На чём основан каждый из перечисленных методов?
2. Дайте определение каждой группы микроорганизмов в соответствии с ГОСТами.
Лабораторная работа № 3
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 673; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!