Определение сульфитредуцирующих клостридий (ГОСТ 29185-91)
Метод основан на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в железосульфитсодержащие среды, инкубировании посевов при (37±1)°С не более 72 ч, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов по культуральным, морфологическим и биохимическим признакам к сульфитредуцирующим клостридиям.
При определении присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клостридий в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении эту навеску или разведение вносят в одну из вязких питательных сред (железосульфитный агар или среда Вильсона-Блера). Перед посевом в питательную среду навеска продукта или его эквивалентное разведение прогреваются при (80±1)°С, 20 минут на водяной бане.
Посевы инкубируют при температуре (37±1)°С не более 72 ч. Ежедневно посевы просматривают для обнаружения признаков роста сульфитредуцирующих микроорганизмов - почернения сульфитной среды.
Из посевов отбирают пробирки с признаками роста - отдельными черными колониями или полностью почерневшей питательной средой на глубине свыше 1 см. Из отобранных пробирок проводят пересевы петлей в чашки Петри на железосульфитный агар или среду Вильсона-Блера. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при температуре (37±1)°С в течение 18-72 ч.
Для сульфитредуцирующих бактерий характерен анаэробный рост.
Из выросших культур готовят два препарата и окрашивают, первый - по Граму, второй - для выявления бактериальных спор. Проводят тест на каталазу.
|
|
|
Сульфитредуцирующие клостридии - грамположительные палочки, располагающиеся в одиночку, попарно, в виде цепочек или скоплений параллельных клеток. При спорообразовании споры овальные или сферические, субтерминальные или терминальные. Сульфитредуцирующие клостридии каталазу не образуют, строгие анаэробы.
Метод выявления и определения количества энтерококков (ГОСТ 28566-90)
Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведения в жидкую селективную среду или на поверхность плотной селективной среды, аэробном культивировании посевов при 37 0С в течение 24-48 ч, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов к энтерококкам.
При выявлении энтерококков из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведении по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить минимальное количество продукта, содержащее энтерококки.
Навеску продукта (в количестве 1г) и его разведение (в количестве 1 см3) высевают непосредственно в 5 см3 щелочной полимиксиновой среды.
Посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 24-48 ч. Через 24 ч проводят предварительный учет результатов, через 48 ч - окончательный.
|
|
|
После инкубирования посевов, учитывают пробирки с признаками роста микроорганизмов: помутнение среды и изменение ее окраски в желтый цвет. Из пробирок с признаками роста, предположительно энтерококков, делают пересевы на поверхность агаризованной молочно-ингибиторной среды (МИС), посевы инкубируют при температуре (37±1)°С в течение 24-48 ч.
Через 24-48 ч инкубирования просматривают и отмечают рост колоний, характерных для энтерококков.
На молочно-ингибиторной среде с теллуритом калия колонии окрашены в черный цвет.
Для подтверждения принадлежности характерных колоний к энтерококкам готовят препараты, окрашивали по Граму по ГОСТ Р 51446.
Энтерококки - грамположительные кокки, расположенные парами, короткими или длинными цепочками.
У колоний определяют наличие каталазы по ГОСТ Р 51446.
Энтерококки каталазу не образуют.
После подтверждения принадлежности характерных колоний к энтерококкам оценивают результаты по каждой пробе отдельно.
При посеве навески продукта или его разведения в жидкие среды, пробирки считатают положительными, если при последующем пересеве на МИС вырастают колонии черного цвета, каталазоотрицательные, а после окраски по Граму и микроскопирования обнаруживают грамположительные кокки, расположенные парами, короткими или длинными цепочками.
|
|
|
Результаты выявления энтерококков в определенной навеске записывают: энтерококки обнаружены или не обнаружены (при этом указывается навеска продукта).
Для определения количества энтерококков 0,1 или 0,2 см3 продукта или его разведения высевают по ГОСТ 26670 на поверхность предварительно подсушенной агаризированной питательной среды (МИС). Посевы инкубируют при температуре (37±1)°С в течение 24-48 ч, после инкубирования учитывают чашки на которых выросло от 15 до 120 колоний.
На МИС колонии энтерококков черного цвета, далее проводят подтверждение принадлежности выросших колоний к энтерококкам.
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 1290; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!