Общие правила в микробиологии

Стр 1 из 6Следующая ⇒

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО РЫБОЛОВСТВУ

Федеральное государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Мурманский государственный технический университет»

Кафедра микробиологии

САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

Методические указания для выполнения лабораторных работ

по дисциплинам «Санитарная микробиология», «Микробиология сырья и продуктов питания» для студентов очной формы обучения

специальностей 020209.65 «Микробиология», 020201.65 «Биология».

Мурманск, 2009

УДК 579.63 (076.5)

ББК 28.4+361я73

С18

Составители:

Лисицынская Елена Евгеньевна - доцент кафедры микробиологии; Литвинова Марина Юрьевна - старший преподаватель той же кафедры;

Методические указания рассмотрены и одобрены кафедрой микробиологии МГТУ, протокол № 7 от 22 января 2009 года.

Рецензент -

Перетрухина Инга Владимировна – доцент кафедры микробиологии, кандидат биологических наук;

Содержание

Введение ……………………………………………………………………	5
Лабораторная работа № 1. Общие правила в микробиологии ………...	9
Лабораторная работа № 2. Микробиологические методы исследования ……………………………………………………………...	11
Лабораторная работа № 3. Микробиологическое исследование мяса и продукции из мяса ………………………………………………………..	26
Лабораторная работа № 4. Микробиологическое исследование рыбы и рыбных изделий ………………………………………………………..	33
Лабораторная работа № 5. Микробиологическое исследование молока и молочных изделий …………………………………………….	34
Лабораторная работа № 6. Микробиологическое исследование плодоовощной продукции ……………………………………………….	36
Лабораторная работа № 7. Метод определения промышленной стерильности консервов …………………………………………………	37
Лабораторная работа № 8. Микробиологическое исследование воды централизованного водоснабжения ……………………………………..	40
Лабораторная работа № 9. Микробиологическое исследование воздуха	46
Лабораторная работа № 10. Санитарно-микробиологическое исследование оборудования, рук и спецодежды персонала …………..	48
Лабораторная работа № 11. Санитарно-гигиеническое исследование почвы ……………………………………………………………………...	50
Лабораторная работа № 12. Определение наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганизмов по методу предельных разведений …………	58
Лабораторная работа № 13. Микробиологическое исследование воды поверхностных водоёмов ………………………………………………..	61
Приложение 1 ……………………………………………………………..	69
Приложение 2 ……………………………………………………………..	73
Приложение 3 ………………………………………………………………	74
Приложение 4 ……………………………………………………………..	78
Приложение 5 ………………………………………………………………	81
Приложение 6 ……………………………………………………………..	83
Приложение 7 ……………………………………………………………..	89
Приложение 8 ……………………………………………………………..	91
Список использованной литературы …………………………………….	92

Введение

Санитарная микробиология - наука о микрофлоре окружающей среды (воздуха, воды, почвы и др.) и связанных с ней процессах, которые могут оказать неблагоприятное влияние на здоровье людей.

С помощью санитарно-микробиологических исследований решают вопрос о наличии или степени вероятности присутствия опасных для человека микробов или их токсинов в объектах внешней среды (воде, воздухе, почве, пищевых продуктах, лекарствах, различных материалах, оборудовании и др.)

Целью санитарно-микробиологического исследования может быть:

- определение присутствия (отсутствия) определенной группы микроорганизмов в определенном объеме (массе) объекта, например, в 1 см³ или в 25 г;

- определение количества микроорганизмов определенной группы в единице объема (массы).

Для обнаружения микроорганизмов в объекте и оценки их количества могут быть использованы различные методы, однако на практике в настоящее время используются два, чаще всего бактериологический, реже микроскопический.

Основными этапами санитарно-микробиологического исследования в случае применения бактериологического метода являются: гомогенизация образца, десорбция микроорганизмов с плотных частиц, приготовление разведений, посев на питательные среды, идентификация выделенных микроорганизмов.

Гомогенизация образца необходима в связи с возможностью неравномерного распределения бактерий в анализируемом объекте. В зависимости от характеристик исследуемого материала для этих целей используют различные методические приемы: от перемешивания простым встряхиванием при исследовании жидкостей до использования специальных приборов при исследовании пищевых продуктов.

Десорбция бактерий с плотных частиц требуется при исследовании объектов твердой консистенции. Для этого исследуемый материал (почва, пищевые продукты и т.п.) либо суспендируют в жидкости, либо с поверхности объекта (оборудование, руки работающих и т.д.) берут смывы или отпечатки. В случае суспендирования, как правило, к навеске объекта весом 10 г добавляют 90 см³ воды. Затем сосуд интенсивно встряхивают вручную или с помощью специального приспособления. В дальнейшем условно принимают 1 см³ полученной суспензии эквивалентным 0,1 г исходного материала. При взятии смывов заданную площадь поверхности протирают тампоном (салфеткой), увлажненным стерильным физиологическим раствором, водой или питательной средой. Затем тампон (салфетку) погружают в пробирку с определенным объемом жидкости для десорбции микроорганизмов с его поверхности. Взятие отпечатков осуществляют, прикладывая к поверхности предмета плотную питательную среду посредством специальных приспособлений.

Приготовление разведений - этап, необходимый в случае определения количества микроорганизмов в объекте. В санитарной микробиологии чаще всего используются десятикратные разведения, то есть такие, в которых концентрация бактерий в каждом последующем разведении в 10 раз меньше чем в предыдущем.

Техника подготовки пробы и приготовления разведений существенно влияет на достоверность получаемых в конечном итоге результатов. Поэтому техника работы с конкретными видами исследуемого материала всегда оговаривается в специальных нормативных документах.

Техника посева на питательные среды зависит от вида исследуемого материала и целей исследования. Если нормируется отсутствие определенных групп микроорганизмов, то на питательные среды непосредственно засевается то количество материала или его суспензии, в котором искомых бактерий не должно быть. Для определения количества бактерий в материале используются специальные методы посева мерного материала на питательный агар с подсчётом выросших колоний (1 колонию обычно образует одна клетка). Результат выражают в колониеобразующих единицах - КОЕ/мл, КОЕ/г или КОЕ /см³. Если, например, на чашке с посевом 1 см³воды, разведённой 1:1000, выросло 120 колоний, таким образом, микробное число составит 1,2·10⁵.

Главной целью санитарной микробиологии является оценка объектов окружающей среды с точки зрения инфекционной опасности для здоровья человека. Непосредственно обнаружить патогенные микробы в объектах внешней среды чрезвычайно трудно ввиду их малой концентрации. В санитарной микробиологии степень эпидемиологической опасности определяют по косвенным показателям загрязнения внешней среды патогенными микроорганизмами. К косвенным показателям отнесли микроорганизмы, постоянно обитающие в организме человека и животных (толстом отделе кишечника и верхнем отделе дыхательных путей), такие микроорганизмы называются санитарно-показательными (СПМ). В качестве санитарно-показательных выбраны микробы, отвечающие следующим требованиям:

- постоянно и в больших количествах присутствующие в выделениях человека и теплокровных животных;

- не имеющие других природных резервуаров или естественных сред обитания;

- сохраняющиеся в объектах в течение определенных сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов;

- не размножающиеся (интенсивно) в объектах внешней среды;

- легко идентифицируемые, поддающиеся количественному определению.

Например, основной показатель фекального загрязнения почвы, пищевых продуктов, рук, спецодежды персонала, воды, лабораторной посуды, предметов обихода, лекарственных средств — бактерии группы кишечной палочки (БГКП) или колиформные бактерии. Воздух оценивают по содержанию стафилококков и стрептококков, попадающих в него вместе с другими микробами из дыхательных путей и полости рта человека. К СПМ относят также эшерихии, клостридии, энтерококки, колифаги (бактериофаги), бактерии рода Proteus. Другими микробами, отражающими санитарное неблагополучие того или иного объекта, являются дрожжевые и плесневые грибы, синегнойная палочка, сальмонеллы. Характеристика микроорганизмов приводится в приложении 1.

В ходе оценки состояния объекта определяют индекс — количество СПМ в единице объема (1 литр, 1 г или 1 кубометр) материала или титр — наименьший объем (в см³), или весовое количество (в г) материала, в котором еще обнаруживаются санитарно-показательные микробы.

Точность санитарно-микробиологических исследований обеспечивается: правильным отбором, хранением и транспортировкой проб в лабораторию, использованием стандартных методов, комплексностью исследования и его повторностью.

Точная видовая принадлежность выделенных культур определяется не всегда. Параметры, на основании которых выделенный микроорганизм относится к той или иной группе определяются нормативно-техническими документами, регламентирующими ход исследования тех или иных видов материалов.

Лабораторная работа № 1

Общие правила в микробиологии

Санитарно-микробиологические исследования объектов окружающей среды, в том числе пищевых продуктов, смывов, воды, воздуха, почвы, различных материалов и др. направлены на профилактику пищевых отравлений желудочно-кишечных заболеваний, связанных с употреблением в пищу контаминированных различными возбудителями пищевых продуктов, что является конечной целью санитарно-микробиологического контроля.

Санитарно-микробиологические исследования позволяют эпидемиологам и гигиенистам оценить опасность объектов окружающей среды как вероятных факторов передачи возбудителей кишечных респираторных и иных инфекций.

Правила отбора проб для исследования, подготовки, культивирования, выявления и определения микроорганизмов строго регламентируются нормативными актами - стандартами, санитарными правилами и нормами, методическими документами.

Задание: ознакомиться с содержанием следующих документов:

- ГОСТ Р 51446 "Продукты пищевые. Общие правила в микробиологии".

- ГОСТ 26668 "Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов".

- ГОСТ 26669 "Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов".

- ГОСТ 26670 "Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов".

- ГОСТ 10444.1 "Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе".

Материалы: ГОСТ Р 51446, ГОСТ 26668, ГОСТ 26669, ГОСТ 26670, ГОСТ 10444.1

Контрольные вопросы

1. Основные требования к помещениям.

2. Аппаратура и оборудование.

3. Требования к персоналу.

4. Подготовка оборудования.

5. Общие правила приготовления питательных сред и реактивов. Сроки хранения питательных сред.

6. Общие правила при отборе проб, транспортировке, приёмке, хранении и обеззараживании лабораторных образов:

- асептический способ отбора проб (способы стерилизации инструментов, посуды);

- с какой целью проводится внешний (визуальный) осмотр образцов?

- каким образом устанавливается масса (объём) пробы для проведения микробиологического анализа?

- методы отбора от кусковой продукции, жидкой или пастообразной, от сыпучей, смешанной консистенции.

7. Методы исследований и обработки результатов:

- приготовление исходной суспензии и последующих разведений;

- методы посева (глубинный метод в плотные среды, поверхностный метод посева на плотные питательные среды, метод посева в жидкие среды, метод мембранных фильтров);

- термостатирование;

- обработка результатов;

8. Основные методы идентификации микроорганизмов.

Лабораторная работа № 2

Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 960; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

12 3 4 5 6 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!