Метод определения плесневых грибов и дрожжей (ГОСТ 10444.12-88)
Метод основан на высеве продукта или гомогената продукта и (или) их разведений в питательные среды, определении принадлежности выделенных микроорганизмов к плесневым грибам, дрожжам по характерному росту на питательных средах и по морфологии клеток.
Масса (объем) навески, предназначенной для приготовления гомогената продукта или исходного разведения - не менее (10±0,1) г (см3).
Плесневые грибы и дрожжи способны расти на селективных средах в аэробных условиях при термостатировании посевов при температуре (24±1)°С.
Продукт и (или) его разведение высевают по ГОСТ 26670-85 параллельно в две чашки Петри и заливают по 15-20 см3 средой Сабуро синтетической с антибиотиками. Чашки вверх крышками ставят в термостат при температуре (24±1°С). Через 5 суток посевы просматривают.
Развитие плесневых грибов на питательных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски.
Рост дрожжей сопровождается образованием выпуклых, блестящих, серовато-белых, кремовых колоний с ровными краями.
При необходимости для разделения колоний дрожжей и плесневых грибов проводят микроскопирование. Результаты микроскопирования оценивают по ГОСТ 10444.12-88.
Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.
Если при испытании продукта на питательных средах обнаружен рост дрожжей и плесневых грибов и их присутствие подтверждено микроскопированием, то дают заключение о присутствии этих микроорганизмов в продукте.
|
|
|
Результаты обрабатывают и пересчитывают отдельно для дрожжей и плесневых грибов. Количество дрожжей и плесневых грибов в 1 г или в 1 см продукта вычисляют по формуле:
(2)
где ΣC - сумма колоний, подсчитанных на всех чашках в двух последовательных разведениях, из которых хотя бы одна чашка содержит не менее 15 колоний;
n1 - количество отобранных для подсчета чашек в первом разведении;
n2- количество отобранных для подсчета чашек во втором разведении;
n - степень разведения продукта.
Результаты испытания записывали в соответствии с требованиями ГОСТ 26670-85.
Определение парагемолитических вибрионов («Методические указания по контролю в рыбной продукции парагемолитических вибрионов-возбудителей пищевых токсикоинфекций». Л., 1991)
Метод основан на выявлении типичных колоний на дифференциально-диагностических средах определенного состава и установлении принадлежности бактерий к парагемолитическим вибрионам по морфологическим и биохимическим свойствам.
Для определения количества парагемолитических вибрионов в 1 г продукта делают высев из разведений.
|
|
|
Для приготовления разведений из пробы отбирают навеску массой 25 г и измельчают в стерильной ступке. Добавляют 225 см3 0,1% пептонной воды с 3% хлорида натрия (разведение 10-1), размешивают, отстаивают в течение 5 мин, из надосадочной жидкости готовят последующие разведения.
Чтобы получить высев 0,1 г продукта засевают из разведения 10-1 по 0,2 см3 надосадочной жидкости на 5 чашек с плотной дифференциально-диагностической средой (ДДА). Из разведения 10-2 высевают по 0,1 см3 на две параллельные чашки, что соответствует посеву по 0,001 г продукта на одной чашке. При необходимости засевают последующие разведения. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24 ч. Производят подсчет типичных колоний. На ДДА вибрионы образуют плоско-выпуклые прозрачные колонии круглой формы с ровными краями, влажной, гладкой, блестящей поверхностью голубовато-зеленого цвета от 1 до 5 мм в диаметре. Результаты роста на ДДА оценивают следующим образом:
- отсутствие роста парагемолитических вибрионов на всех пяти чашках посева из разведения 10-1 означало, что в одном грамме парагемолитические вибрионы отсутствуют или содержатся в количестве менее 10 клеток;
|
|
|
- обнаружение роста 10-50 типичных колоний на пяти чашках посева из разведения 10-1 при отсутствии роста на двух чашках с посевом при разведении 10-2 указывало, что в 1 г продукта содержится от 100 до 500 жизнеспособных клеток парагемолитических вибрионов.
Для подтверждения принадлежности выделенных на дифференциально-диагностической среде микроорганизмов к парагемолитическим вибрионам проводят изучение морфологических свойств и ставят биохимические тесты.
Парагемолитические вибрионы - мезофильные грамотрицательные палочки, прямые или слегка изогнутые, не образующие спор, активно подвижны, содержат цитохромоксидазу, не расщепляют лактозу и сахарозу, растут на питательных средах с содержанием хлорида натрия от 3 до 8 %, декарбоксилируют лизин, образуют индол, ферментируют (без газообразования) арабинозу, глюкозу, мальтозу, не образуют ацетилметилкарбинол.
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 1577; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!