Кислотный гидролиз простого белка
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
При кислотном гидролизе белки распадаются сначала на высокомолекулярные пептиды, затем на низкомолекулярные пептиды, дипептиды и, наконец, на аминокислоты.
Полный гидролиз белка протекает при многочасовом кипячении раствора в круглодонной колбе с воздушным холодильнике в присутствии соляной или серной кислоты.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) раствор яичного белка; 2) HCl, конц.; 3) NaOH, 10 %; 4) H2SO4, 1 %; 5) круглодонная колба с воздушным холодильником; 6) электрическая плитка с асбестовой сеткой; 7) штатив.
ХОД РАБОТЫ:
1. Кислотный гидролиз простого белка. Для гидролиза в круглодонную колбу отмеривают 20 мл раствора яичного белка и 5 мл концентрированной соляной кислоты, колбу закрывают пробкой с длинной стеклянной трубкой и закрепляют на штативе с асбестовой сеткой. Содержимое кипятят (под тягой) 45-90 мин.
2. Открытие промежуточных продуктов распада белка в гидролизате при помощи биуретовой реакции. По окончании кипячения в пробирку наливают 5 капель гидролизата белка и нейтрализуют 10 % раствором щелочи по красному лакмусу (опускают кусочек лакмуса в пробирку и помешивают стеклянной палочкой). После нейтрализации гидролизата (при посинении лакмуса) проводят биуретовую реакцию, прибавляя 2 капли CuSO4.
Промежуточные продукты распада белка – пептоны – при проведении биуретовой реакции дают розовое или красное окрашивание, а белки – сине-фиолетовое.
При полном гидролизе белка (2,5 часа до аминокислот биуретовая реакция с гидролизатом белка отрицательная.
По окончании гидролиза гидролизат используют для лабораторной работы №10.
Дата добавления: 2016-01-04; просмотров: 46; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!