Хроматографическое разделение аминокислот на бумаге

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

С помощью хроматографии можно выделить отдельные вещества из небольшого количества сложной смеси.

Отдельные аминокислоты обладают различной растворимостью в двух частично смешивающихся жидкостях, одной из которых является вода, а другой – водонасыщенный органический растворитель, например фенол. Из них один растворитель должен быть полярный (неподвижная фаза), а другой – неполярный (подвижная фаза). Более гидрофобные аминокислоты, лучше растворяющиеся в неполярном растворителе, движутся с большей скоростью от линии старта, чем гидрофильные аминокислоты. В результате этого смесь аминокислот по окончании хроматографического разделения оказывается на разном расстоянии от линии старта.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) растворы аминокислот; 2) смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (15:3:7) или водонасыщенный раствор фенола; 3) нингидрин, 0,2 % спиртовой раствор; 4) вертикальные хроматографические камеры; 5) полоски хроматографической бумаги (длина 20-30 см, ширина 10-12 см); 6) капилляры для нанесения аминокислот; 7) пинцеты; 8) сушильный шкаф, нагретый до 70-90 ºС; 9) линейка с делениями.

ХОД РАБОТЫ:

На полоске хроматографической бумаги простым карандашом проводят стартовую линию на расстоянии 2-3 см от нижнего края. В точки 1,2,3 (обозначенные карандашом на расстоянии 2 см друг от друга) наносят специальной пипеткой (или стеклянным капилляром) аминокислоты: в точку 1 - триптофан (аланин или аргинин), в точку 2 - глицин (аргинин или лизин), в точку 3 - их смесь. Нанесение проводят в несколько приемов, следя за тем, чтобы пятно раствора при каждом прикосновении капилляра к бумаге не растекалось более чем на 3 мм. Каждую последующую порцию раствора наносят после полного высыхания предыдущей. Диаметр пятна не должен превышать 5 мм. Расстояние точек от бокового края хроматографической бумаги должно быть не менее 2 см. Полоску бумаги следует держать за края (!)

Полоску хроматографической бумаги с нанесенными на нее растворами (после высушивания) помещают в хроматографическую камеру, в которую предварительно (за сутки) налита разделительная система бутанола, уксусной кислоты и воды (15:3:7) или водонасыщенный фенол. Нижний край хроматограммы погружают в жидкость примерно на 3-5 мм и подвешивают в камере, которую затем закрывают.

После достижения фронтом растворителя (водной смеси, бутанола и уксусной кислоты или фенола) верхнего конца бумаги (1-1,5 часа), полоску просушивают в сушильном шкафу, предварительно отметив границу фронта растворителя. После этого опускают её в 0,2 % спиртовой раствор нингидрина на 3 секунды. Затем просушивают в сушильном шкафу при температуре 70-90 ºС (15 минут). Позиции аминокислот на хроматограмме выявляются в виде сине-фиолетовых пятен.

Вклейте хроматограмму в тетрадь. Идентифицируйте пятна, рассчитав для каждого пятна коэффициент распределения R_f или скорость перемещения по формуле:

R_f = а/ b,

где а – расстояние в мм, пройденное аминокислотой от места нанесения аминокислоты до середины ее пятна; b – расстояние в мм от места нанесения аминокислоты до фронта растворителя.

РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:

В чем принцип метода хроматографии?

Перечислите методы хроматографического разделения аминокислот?

Как проводится восходящая хроматография на бумаге?

Какие системы растворителей используются для распределительной хроматографии на бумаге?

Какая цветная реакция лежит в основе хроматографического выявления аминокислот на бумаге?

Объясните принцип разделения аминокислот методом тонкослойной ионообменной хроматографии?

В чем состоит принцип метода электрофореза?

Раздел 2. ФЕРМЕНТЫ

Тема 6

Дата добавления: 2016-01-04; просмотров: 33; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 7 8 9 10 111213 14 15 16 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!