Цель: изучение правил работы в микробиологических лабораториях и общих правил работы с микроскопом.
Продолжительность занятия: 4 часа
Оборудование: Микроскопы.
Программа занятия:
1. Организация микробиологических лабораторий и правила работы в них.
2. Микроскопы и микроскопическая техника.
Задание для выполнения лабораторной работы:
Изучить правила работы с микроскопом.
Правила работы в микробиологических лабораториях
При работе в микробиологической лаборатории обучающийся обязан строго соблюдать правила внутреннего распорядка.
1. Все должны работать в халатах, шапочках и сменной обуви
2. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.
3. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке.
4. При случайном попадании заразного материала на стол, пол и пр. это место необходимо тщательно обработать дезинфицирующим раствором.
5. Хранение, наблюдение за культурами микроорганизмов и их уничтожение должны производиться согласно специальной инструкции.
6. По окончании работы руки следует тщательно вымыть, а при необходимости обработать дезинфицирующим раствором.
Методические указания:
Общие правила работы с микроскопом. Работа с любым микроскопом состоит из правильной установки освещенности поля зрения и препарата и его микроскопии разными объективами. Освещение может быть естественным (дневным) или искусственным, для чего используют специальные источники света. Место для микроскопа выбирают дальше от прямого солнечного света. Работа на столе с темной поверхностью меньше утомляет глаза. Лучше смотреть в окуляр левым глазом, не закрывая правого.
|
|
|
Переносят микроскоп, держа одной рукой за штатив, другой - за основание микроскопа. Следует предохранять микроскоп от толчков, соприкосновения с сильнодействующими веществами типа кислот, щелочей. Не рекомендуется вынимать окуляр из трубы, чтобы не загрязнять пылью трубу и объективы. Во время работы желательно защищать микроскоп от дыхания, так как конденсация паров ведет к его порче.
Линзы должны быть всегда чистыми. Микроскоп следует хранить в чехле. Нельзя касаться пальцами оптических поверхностей.
При микроскопии препаратов следует строго придерживаться определенного порядка в работе:
1) приготовленный и окрашенный мазок поместить на предметный столик (укреплять зажимами обязательно);
2) установить освещение так чтобы в поле зрения появляется светлое кольцо диафрагмы;
3) повернуть револьвер до необходимого объектива (до щелчка);
3) осторожно опустить тубус микроскопа до появления объектов исследовании;
4) провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, так как это может повлечь поломку препарата или фронтальной линзы.
|
|
|
По окончании работы микроскоп протирается и убирается в чехол, предметные стекла промываются и просушиваются.
Контрольные вопросы:
- Почему так много правил поведения в микробиологических лабораториях?
- Как хранится микроскоп?
- Расскажите правила переноса микроскопа.
Лабораторная работа № 2
Простейшие микробиологические исследования
Цель: рассмотрение вариантов приготовления препаратов.
Продолжительность занятия: 4 часа
Оборудование: Микроскопы,
Программа занятия
1. Приготовление препаратов для исследования живых клеток.
2. Приготовление препаратов фиксированных.
Задание для выполнения лабораторной работы:
Изучить технику приготовления препаратов.
Методика приготовления препарата:
Пробирку с культурой держат в левой руке почти в горизонтальном положении вблизи горелки. Обожженной в пламени бактериологической иглой из пробирки берут небольшое количество микробной массы. Перед взятием культуры правой рукой вынимают ватную пробку из пробирки, зажимая ее между мизинцем и ладонью, а края пробирки обжигают на пламени горелки. Иглу держат в правой руке большим, указательным и средним пальцами.
|
|
|
Если культуру берут из жидкой среды, не следует сильно наклонять пробирку, чтобы не смочить ее края и пробку. Для взятия культуры лучше пользоваться петлей. После взятия культуры края пробирки и пробку обжигают в пламени и закрывают пробирку.
1. Исследование живых клеток микроорганизмов методами "раздавленной" и "висячей" капли. Оба метода применяют для выявления подвижности клеток микроорганизмов, наблюдения за размножением, образованием и прорастанием спор, установления реакции микроорганизмов на химические соединения и физические факторы воздействия, изучения размеров клеток, характера их расположения и определения запасных веществ клетки.
Препараты микроскопируют, слегка затемняя поле зрения; конденсор немного опускают, поступление света регулируют вогнутым зеркалом. Вначале пользуются малым увеличением - объектив 8х, после того как обнаруживают край капли, устанавливают объектив 40х.
Метод "раздавленной" капли. На чистое предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. В нее вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы под ним не образовывались пузырьки воздуха. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному и удаляют избыток воды фильтровальной бумагой, поднося ее к краям покровного стекла.
|
|
|
Метод "висячей" капли. Применяют для длительных наблюдений за клетками микроорганизмов. На стерильное покровное стекло наносят иглой негустую суспензию микроорганизмов, выращенных в жидкой питательной среде или подготовленных для данной цели в физиологическом растворе (0,5 %-й раствор NaCl). Покровное стекло переворачивают и помещают на стерильное предметное с лункой посредине так, чтобы капля свободно свисала над лункой. Для герметичности края лунки смазывают вазелином.
2. Фиксированные препараты микроорганизмов.В микробиологии часто готовят фиксированные препараты. Их рассматривают под микроскопом окрашенными. Под фиксацией подразумевают такую обработку живого объекта, которая дает возможность быстро прервать течение жизненных процессов в нем, сохранив тонкую структуру. В результате фиксации клетки прочно прикрепляются к стеклу и лучше прокрашиваются. Фиксация необходима в случае работы с патогенными микроорганизмами для безопасности.
Приготовление мазка. На чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. Прокаленной бактериологической иглой из пробирки с культурой берут небольшое количество микробной массы и вносят в каплю. Каплю тщательно размазывают петлей по стеклу на площади приблизительно 4 см2. Суспензию нормальной густоты размазывают тонким слоем по стеклу, затем мазок сушат на воздухе при комнатной температуре или слабом нагревании, держа препарат высоко над пламенем горелки. Сильное нагревание препарата при сушке не рекомендуется, так как белки коагулируют, искажая структуру и форму клеток. Высушенный препарат фиксируют.
Фиксация мазка. Проводят над пламенем горелки при исследовании формы клеток. В первом случае препарат три-четыре раза медленно проводят нижней стороной над племенем горелки.
Окрашивание препарата. На мазок наносят несколько капель красителя. В зависимости от вида красителя и цели исследования продолжительность окрашивания меняется от 1 до 5 мин, в отдельных случаях до 3 мин и дольше. По окончании окрашивания препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют воду, подсушивают на воздухе и микроскопируют.
Существуют простые и дифференцированные методы окраски. При простой окраске используют какой-либо один краситель, например метиленовый синий, фуксин, генциан фиолетовый в щелочных или карболовых растворах. Прокрашивается вся клетка. При дифференцированной окраске отдельные структуры клетки окрашиваются разными красителями. Таковы методы окраски по Граму, окраска спор.
Контрольные вопросы:
- Расскажите принцип приготовления препарата методом «раздавленной» капли.
- Расскажите принцип приготовления препарата методом «висячей» капли.
- Как проводится фиксация мазка?
- Как проводится окрашивание препарата?
Лабораторная работа №3
Дата добавления: 2022-07-02; просмотров: 18; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!