ФИТОГОРМОНЫ И СИНТЕТИЧЕСКИЕ РЕГУЛЯТОРЫ РОСТА И РАЗВИТИЯРАСТЕНИЙ В БИОТЕХНОЛОГИИ ИРАСТЕНИЕВОДСТВЕ

 

Природные и синтетические регуляторы роста и развития растений, или фиторегуляторы, являются мощным средством управления онтогенезом растений. Поэтому они находят широ­кое применение в биотехнологии сельскохозяйственных расте­ний и в практическом растениеводстве.

Фиторегуляторы — важное средство регулирования диффе-ренцировки клеток, клеточных делений, образования новых тка­ней и органов, темпов роста и развития растений, их продук­тивности и качества урожая. Генетическая инженерия растений также опирается на знания о фиторегуляторах.

В современном растениеводстве фиторегуляторы применя­ются также в целях повышения урожайности и устойчивости агроценозов к неблагоприятным факторам среды, позволяют существенно облегчить ряд технологических операций. В на­стоящее время создаются фиторегуляторы нового поколения, воздействующие на растения в минимальных дозах (всего не­сколько миллиграммов на 1 га посевов). Это имеет огромное экологическое значение.

Точные знания о гормональной регуляции процессов жизне­деятельности растения, возможностях управления онтогенезом, практическом применении фиторегуляторов в растениеводстве необходимы для успешной работы современному специалисту сельского хозяйства и прежде всего агроному.

 

ГОРМОНАЛЬНАЯ СИСТЕМА РАСТЕНИЙ

 

Понятие о фитогормонах. Гормональной регуляции живого организма принадлежит важная роль в реализации наследст­венной программы и адаптации к меняющимся условиям среды.

309

Впервые мысль о наличии у растений веществ регуляторной природы высказана Чарльзом Дарвиным в 1880 г. в работе «Способность к движению у растений» на основании экспери­ментов с изгибами проростков по направлению к источнику света. Одновременно с Ч. Дарвином выдающийся немецкий ботаник и физиолог растений Ю. Сакс постулировал присутст­вие в растении веществ, ответственных за формирование и раз­витие стебля, листа и корня. Однако эти предположения не по­лучили признания ученых того времени.

Интенсивные исследования по изучению и выделению регу-ляторных веществ растений начались в начале XX в. В 1909—1910 гг. Г. Фиттингом было обнаружено вещество, вызы­вающее разрастание завязи и образование бессемянных плодов орхидей, названное им, по аналогии с регуляторными вещест­вами животных, гормоном. За несколько лет до этого была ус­тановлена высочайшая рострегулирующая активность этилена, а в конце 20-х годов — выделен из растений ауксин. В это же время Н.Г. Холодным и Ф. Вентом была разработана теория тропизмов растений, названная по именам ее создателей, а в конце 30-х годов М.Х. Чайлахян выступил с гипотезой флориге-на — гипотетического фиторегулятора, обусловливающего пере­ход растения к формированию генеративных органов и цвете­нию.

Продуктивными в изучении гормонов растений оказались 50—60-е годы, когда были выделены гиббереллины, цитокини-ны и абсцизовая кислота и описаны их свойства. В наше время выделено еще несколько эндогенных регуляторных ве­ществ — брассиностероиды, жасминовая и салициловая кисло­ты, некоторые олигосахариды, а также активно изучаются не­гормональные регуляторы роста растений — полиамины, ряд фенольных соединений, другие вещества.

Одновременно предпринимались попытки поиска, создания и использования регуляторных веществ в растениеводстве. Вначале это были синтетические аналоги ауксина для индук­ции корнеобразования при вегетативном размножении расте­ний. На рубеже 60-х годов были открыты ретарданты — веще­ства, замедляющие осевой вегетативный рост. Они являются наиболее распространенными фиторегуляторами, применяемы­ми в сельском хозяйств. В настоящее время ведется активный поиск фиторегуляторов с другими ценными свойствами, особен­но препаратов с антистрессовым и репаративным действиями.

Согласно современным представлением о регуляторах роста и развития растений фитогормонами называют вещества, ко­торые синтезируются в растениях, транспортируются по ним и

 

 

310

в малых концентрациях способны вызывать ростовые или фор­мативные эффекты.

Таким образом, первая особенность фитогормонов — эндо­генное происхождение. Большинство фитогормонов образуется из органических кислот, в частности — аминокислот. Измене­ния в интенсивности синтеза того или иного фитогормона, вы­званные внутренними или внешними причинами, приводят и к ответной реакции растения — переходу к другому характеру ростовых или формативных процессов.

Вторая особенность фитогормонов — возможность транспор­тировки их по растению. Биологический смысл этого условия заключается в том, что фитогормон, образовавшийся в одном органе, например в апикальной меристеме стебля, должен об­ладать свойством регуляции ростовых процессов в других орга­нах, например в корне. Именно таким образом достигается взаимовлияние органов, целостность растения. Ряд веществ, об­ладающих высокой регуляторной способностью, например неко­торые фенольные соединения, не могут быть признаны фитогор­монами, так как неспособны к транспортировке и воздействуют лишь в месте своего синтеза.

Третья особенность — способность в малых концентрациях вызывать заметные ростовые или формативные эффекты. Фито­гормоны действуют на растение в малых концентрациях поряд­ка 10^-13—10^-7 М. Примером ростового эффекта может служить ускорение или замедление роста стебля, а формативного — де­фолиация.

Не следует смешивать понятия гормона животных и гормо­на растений (фитогормона). Гормоны животных синтезируются в специальных органах — железах внутренней секреции, в то время как у растений такая специализация тканей и органов отсутствует. Гормоны животных не действуют в месте своего синтеза, а фитогормоны способны влиять на клетки, в которых они образуются. В этом отношении фитогормоны близки к гис-тогормонам животных.

Молекулярные механизмы действия фитогормонов. Прак­тическое использование фитогормонов основано на глубоком знании молекулярных механизмов их действия, изучению кото­рых в связи с этим придается большое значение. В настоящее время выявлена общая принципиальная схема образования фитогормонов, реализации их регуляторного действия, вклю­чающая биосинтез из предшественника, связывание со специ­фичным к данному гормону белковым рецептором с образова­нием активированного гормон-рецепторного комплекса, воздей-

311

 

ствие этого комплекса на геном растения и (или) на активность определенных ферментативных систем.

Фитогормоны синтезируются в растении из органических кислот, причем у нескольких фитогормонов может быть один и тот же предшественник. Так, мевалоновая кислота является ис­ходным веществом для синтеза четырех классов фитогормонов: стимуляторов — гиббереллинов, цитокининов, брассиностерои-дов и ингибитора — абсцизовой кислоты (рис. 6.1).

При изменении условий внешней среды в растении происхо­дят изменения в синтезе того или иного фитогормона. Ключе­вые ферменты, действующие на развилках путей биосинтеза фитогормонов, проявляют высокую чувствительность к измене­нию факторов среды (освещенности, температуры, и т. д.), что приводит к преимущественному синтезу определенного фито­гормона. Примером такого воздействия внешних условий может служить повышенный синтез гиббереллинов при увеличении продолжительности освещения и наоборот, снижение содержа­ния ауксина и увеличение уровня фенольных ингибиторов рос­та при избыточной инсоляции.

Образовавшаяся молекула фитогормона в дальнейшем транспортируется по растению от места своего синтеза к клет­кам-мишеням, т. е. клеткам, чувствительным к данному фито-гормону. Транспорт фитогормонов происходит по проводящей системе растения, с током пасоки и ассимилятов, а также по межклеточному пространству.

Молекулы фитогормонов способны проникать в клетки-ми­шени двумя путями: перемещаться в соответствии с градиен­том концентрации по плазмодесмам — протопластным кана-

312

лам, связывающим соседние клетки, или путем активного транс­порта через пограничную мембрану клетки — плазмалемму.

Установлено, что гормональные эффекты реализуются пу­тем конформационных изменений белковых молекул (варьиро­вание формы и пространственной структуры), занимающих в клетке стратегически важное положение. Такие белки могут функционировать как рецепторы фитогормонов, преобразовате­ли сигнала между рецептором и определенной ферментативной системой, а также как ферменты, активаторы или ингибиторы ферментов, компоненты мембранных транспортных систем. Гормональные эффекты во всех чувствительных клетках можно представить как цепь скоординированных изменений формы множества специфичных для данной клетки белков.

Первичная структура белка (определенная последователь­ность аминокислот) уже содержит необходимую информацию для приобретения белковой молекулой вторичной и третичной структур. Четвертичная структура определяется формой от­дельных субъединиц. Биологическая активность белковой моле­кулы, в частности фермента, зависит от его третичной и четвер­тичной структур, на которую влияют следующие факторы.

1. Аллостерический модулятор — вещество, которое нековалентно связывается с регуляторным (аллостерическим) центром белка, находящимся на определенном расстоянии от его актив­ного центра.

2. Ковалентные модуляторы, например фосфат, который присоединяется к белкам с помощью ферментов киназ и отщеп­ляется фосфатазами.

В клетке молекула фитогормона взаимодействует со своим специфическим белковым рецептором и обратимо связывается с ним, образуя гормон-рецепторный комплекс (ГРҚ), вследст­вие чего происходит активация белковой молекулы рецептора за счет его взаимодействия с фитогормоном (рис. 6.2).

Рецепторы фитогормонов в настоящее время изучены край­не недостаточно. Имеющиеся данные указывают, что, по-види­мому, большая их часть представляет собой глобулярные бел­ки, с очень высоким сродством связывающие фитогормоны. В одной клетке могут находиться несколько видов рецепторов од­ного и того же фитогормона, что обусловливает и различные виды реакции растения на один и тот же фитогормон, т. е. по­лифункциональность действия фитогормона.

Интенсивность реакции на фитогормон определяется не только собственно концентрацией фитогормона, но и концен­трацией его рецептора, так как полной физиологической актив­ностью обладает их комплекс, а не отдельные компоненты. Это

313

 

обусловливает различную чувствительность клеток к одному и тому же гормону. Как правило, клетки-продуценты данного фитогормона имеют малую чувствительность к нему, обусловлен­ную низкой концентрацией рецепторов.

С момента образования гормон-рецепторного комплекса возможны два основных пути реализации фитогормональной активности.

Первый путь связан с появлением новых ферментов или значительным изменением в содержании уже существующих ферментов клетки. Он обусловлен воздействием фитогормонов на генетические процессы. В связи с тем, что в этом случае происходит репрограммирование работы генов и синтез новых белков, проходит значительное время (от десятков минут до не­скольких часов) от момента изменения концентрации фитогор-мона до проявления его эффекта.

Второй путь обусловлен изменением активности белков, главным образом — ферментов, уже существовавших в клетке до изменения концентрации фитогормона, за счет изменения их пространственной конформации. Поскольку второй путь не свя­зан с синтезом новых белков, время проявления эффекта фито-

314

гормона в этом случае гораздо меньше — всего несколько ми­нут.

Регуляцияэкспрессиигенов.Фитогормональная регуляция экспрессии генов обусловливает такие важней­шие процессы в жизни растительной клетки, как дифференцировка и дедифференцировка, деление, рост и адаптация к но­вым метаболическим условиям. Современные представления о механизмах такой регуляции позволяют представить ее в виде последовательности событий (рис. 6.3).

Проникновение фитогормона в клетку и образование гор­монрецепторного комплекса могут быть связаны воедино. Это происходит тогда, когда рецептор фитогормона находится на внешней стороне плазмалеммы.

Слабо изучено превращение α-ГРК в форму, которая спо­собна связываться с хроматином ядра и его проникновение че­рез ядерную мембрану. Вероятным представляется и то, что α-ГРК не взаимодействует с хроматином, а лишь вызывает цепь реакций, приводящих к подобному эффекту.

Необходимо вспомнить, что соматическая клетка содержит всю генетическую информацию, заложенную в оплодотворенной яйцеклетке, из которой она образовалась. Во время дифференцировки, когда клетка приобретает специализацию, например становится фотосинтезирующей клеткой палисадной паренхи­мы, большая часть ее ДНК сворачивается в плотные клубки вместе с определенным набором ядерных белков, препятствую­щих транскрипции. Лишь небольшая часть хроматина (около 10%) находится в относительно разрыхленном состоянии. Эта часть состоит из трех видов: 1) транскрипционно неактивной на протяжении всего срока жизни клетки (молчащей); 2) постоян­но экспрессируемой; 3) индуцируемой гормонами или другими сигнальными молекулами либо прямо, либо опосредованно че­рез метаболиты или медиаторы. Ядерный хроматин содержит ДНК, белки, богатые аргинином и лизином (и поэтому имею­щие щелочную реакцию), которые называют гистонами, и негистоновые кислые белки. Гистоны играют основную роль в плотности упаковки ДНК и, следовательно, ее доступности для транскрипции и гормональной индукции.

Предположительно, что α-ГРК, взаимодействуя со специ­фичными для него кислотными белками, так изменяет конфор-мацию хроматина, что это позволяет РНК-полимеразе II при­соединиться к ДНК и провести транскрипцию контролируемого данным фитогормоном гена или группы генов. Возможен и не­сколько другой механизм, установленный на животных клетках, когда α-ГРК присоединяется к участку ДНК, называемому эн-

 

315

 

хансер, т. е. специфичной регуляторной непромоторной области, открывающей данный ген для транскрипции.

Относительно    посттранскрипционных              превращений

про-мРНК существует гипотеза, что наряду с транскрипцией собственно гена происходит и транскрипция регуляторных сай­тов, комплементарных лишь экзонам; впоследствии взаимодей­ствующих с этими областями и способствующими точной вы­резке интронов.

Примером фитогормональной регуляции избирательной экс­прессии генов может служить индукция синтеза α-амилазы при прорастании зерновки ячменя.

α-Амилаза, в отличие от других амилаз, которые постоянно в небольших количествах присутствуют в растительных клет­ках, синтезируется при наступлении благоприятных условий для'прорастания семени. При набухании зародыш продуцирует гормон гиббереллин. Гиббереллин диффундирует к клеткам алейронового слоя, соединяется с белками-рецепторами, обра­зуя активный гормон-рецепторный комплекс, который снимает репрессорную блокаду, препятствующую экспрессии гена α-амилазы.

Готовый фермент в свою очередь диффундирует в эндос­перм и расщепляет крахмал до растворимых Сахаров, которые впитываются щитком и служат энергетическим и структурным материалом для роста зародыша.

В зерновке с удаленным зародышем α-амилаза не образует­ся, так как нет гиббереллина — индуктора биосинтеза этого фермента. Добавление раствора гиббереллина к таким зернов­кам включает биосинтез α-амилазы.

Примеры избирательной индукции синтеза ферментов из­вестны для каждого компонента фитогормональной системы.

Фитогормональная регуляция на уровне генетических про­цессов требует значительного времени, как правило, несколь­ких часов от момента увеличения уровня гормона до проявле­ния реакции. Однако известны примеры, когда новые мРНК появлялись уже спустя 5 мин, а соответствующие им бел­ки—через 15 мин после резкого подъема концентрации фито-гормона в клетке, но это скорее исключение, чем правило. Среднее время фитогормональной регуляции работы генома ис­числяется интервалом в несколько часов. В то же время, расте­ние способно ответить на изменение уровня некоторых гормо­нов всего за несколько десятков минут. Эти «быстрые» реакции связаны со способностью фитогормонов регулировать актив­ность уже существующих ферментов растительной клетки.

 

317

 

Регуляцияактивностиферментов. Вто-

ричныепосредникифитогормонов.В этом случае реакция на фитогормон проявляется в течение несколь­ких минут с момента резкого повышения его концентрации. Такие эффекты объясняются изменением активности ферментов, причем общее число молекул того или иного фермента практи­чески не меняется, но их активность возрастает или снижается вследствие взаимодействия с аллостерическим эффектором, в роли которого может выступать фитогормон или его метаболит, или ковалентным модулятором типа Р0³₄, что приводит к из­менению сродства фермента к субстрату. Таким образом, быст­рые ответные реакции на фитогормон объясняются изменением активности уже существующих в клетке ферментов.

Ярким примером «быстрых» реакций растения на фитогор­мон может служить стимуляция растяжения клеток колеоптиля под действием ауксина, которая отмечается уже через 5 мин по­сле начала обработки. Данный эффект объясняется тем, что ауксин при взаимодействии со своим рецептором, локализован­ном в плазмалемме, активирует работу протонной пом­пы — ферментативной транспортной системы, производящей пе­ренос протонов из клетки в область клеточной стенки. Происхо­дящее при этом подкисление гемицеллюлоз и пектиновых веществ, входящих в состав клеточной стенки, приводит к тому, что связи между ее компонентами ослабляются и за счет тургор-ного давления, создаваемого вакуолью, клетка растягивается.

В последнее время активно проводятся исследования вто­ричных посредников (мессенджеров) фитогормонов. Интерес к ним возник в связи с открытием циклического аденозинмоно-фосфата (цАМФ) как посредника, усилителя действия гормона животных — адреналина. В растениях также обнаружена цАМФ, и недавно показано, что это вещество выполняет анало­гичные функции и в растительном организме.

Другими общими вторичными посредниками для раститель­ного и животного царств являются Са²⁺, циклический гуанозин-монофосфат (цГМФ) и, возможно, метаболиты фосфатидилино-зитола. Список вторичных посредников, по-видимому, не исчер­пывается названными веществами и в недалеком будущем будет расширен. Вторичные посредники находятся в очень тон­ких взаимоотношениях друг с другом, о механизмах которых в настоящее время практически ничего не известно.

В общем виде действие вторичного посредника заключается в том, что небольшое число молекул гормона в клетке вызывает продукцию гораздо большего числа молекул вторичного по­средника, а последние в свою очередь положительно или отри-

 

318

цательно влияют на активность белковых молекул. Таким обра­зом происходит умножение сигнала, исходно возникшего при связывании гормона с рецептором. Наиболее полно механизм действия вторичного посредника гормона изучен на примере цАМФ (рис. 6.4).

Гормон присоединяется к своему специфическому рецептору, расположенному в плазмалемме таким образом, что сайт связы­вания гормона располагается на внешней поверхности мембра­ны. В результате этого взаимодействия рецептор изменяет свою конформацию и активирует ферментативный комплекс адени-латциклазы, также частично расположенный в мембране. Аде-нилатциклазный комплекс (АК) включает в свой состав помимо собственно фермента, осуществляющего превращение АТФ в цАМФ, еще и регуляторные вещества белковой природы (G-бел-ки). G-белки, в свою очередь, активируются при взаимодействии с другим нуклеотидом — гуанозинтрифосфатом (ГТФ), что при­водит к их диссоциации на субъединицы, которые и представля­ют собственно управляющий агент синтеза цАМФ.

Образовавшаяся с помощью аденилатциклазного комплекса цАМФ в дальнейшем взаимодействует со специфической протеинкиназой (ПК) и активирует ее. цАМФ-зависимая протеинки-наза в своей неактивной форме представляет собой тетрамерный белок, состоящий из двух регуляторных (Р) и двух катали­тических (К) субъединиц— Р₂К₂. Каталитические субъединицы приобретают активность только при диссоциации комплекса, происходящей в результате связывания цАМФ с регуляторны-ми субъединицами:

Р₂К₂ (неактивный фермент) + 4цАМФ = (Р + цАМФ₂)₂ + 2К (активные субъединицы)

После диссоциации активные субъединицы ПК обратимо фосфорилируют ряд других ферментов, катализирующих ключе­вые реакции метаболизма, изменяя их активность, что в конеч­ном итоге и обусловливает физиологический эффект гормона. 1 Сходным образом действуют и другие вторичные посредни­ки, в частности, имеющие наибольшую значимость для расте­ний — цГМФ и комплекс кальций — кальмодулин.

Посредническая деятельность Са ⁺ проявляется в следующем: I) под действием гормона в клетке резко возрастает концентра­ция Са ⁺; 2) четыре иона кальция Са²⁺ соединяются с молекулой белка кальмодулина и активируют его; 3) комплекс Са²⁺ с кальмодулином влияет на активность белков одним из двух способов: путем прямого взаимодействия с ферментом-мишенью или через активируемую этим комплексом протеинкиназу.

Классификация, структура и функции фитогормонов. В на­стоящее время известно шесть групп фитогормонов. По-видимо­му, список гормонов растений ими не исчерпывается. Открытие нового фитогормона —очень редкое событие, так как эти веще­ства присутствуют в растении в очень небольших концентраци­ях. Тем не менее, очевиден прогресс в изучении регуляторных систем растения, связанный с совершенствованием методов ис­следования.

Ауксины. Открыты в 20-е годы как фактор тропизмов растений. В начале 30-х годов Ф. Кегль выделил в чистом виде и установил химическое строение природного ауксина — индо-лил-3-уксусной кислоты (ИУК):

320

ИУК образуется из аминокислоты — триптофана. Биосинтез ИУК изучен довольно полно. Показано, что между содержани­ем предшественника ИУК триптофана и содержанием собст­венно ИУК не всегда прослеживается корреляция.

Биосинтез ИУК включает отщепление от триптофана ами­ногруппы с образованием индолил-3-пировиноградной кислоты (ИПВК), декарбоксилирование ИПВК с образованием индо-лил-3-ацетальдегида (ИААльд) и окисление его в ИУК. Анало­гично из фенилаланина образуется ФУК. Возможны и другие пути синтеза, в частности, у крестоцветных ИУК может образо­вываться и из глюкобрассицинов через индолил-3-ацетонитрил.

Ферменты, катализирующие образование ауксинов (трансаминаза, декарбоксилаза, аминооксидаза, альдегиддегидрогеназа), не специфичны для синтеза ИУК. Это свидетельствует о том, что регуляция синтеза данного гормона не связана с изме­нением активности этих ферментов, а другие пути регуляции пока не исследованы.

Уровень ауксинов в клетке зависит не только от синтетиче­ских процессов, но и от инактивации. ИУК очень нестойкое ве­щество, быстро разлагается, особенно под действием света. В растительных клетках имеется ферментативная система ИУК-оксидазы, эффективно разрушающая ИУК- Известно, что активность ИУК-оксидазы во многом зависит от внешних усло­вий, в частности — освещенности.

Основным местом синтеза ауксинов являются апикальные меристемы стебля, откуда они поступают в другие органы. В меньшей степени синтез этого фитогормона происходит в листь­ях, причем в молодых листьях ауксина образуется больше, чем в старых.

Скорость перемещения ауксина в растении довольно не­большая— 10—15 мм/ч. Это обусловлено тем, что ауксин не включается в систему транспорта ассимилятов, а передвигает­ся по живым клеткам. При этом в апикальный конец клетки ауксин проникает пассивно вместе с ионами Н⁺, а в базальном конце активно переносится через плазмалемму.

Известен ряд ингибиторов транспорта ауксина. Таким свой­ством обладают 2, 3, 5-три'иодбензойная кислота (ТИБК), N-1-нафтилфталаминовая кислота, морфактин, а также другой фитогормон — этилен.

Механизм поглощения ауксина клеткой включает две фазы: 1) быстрое обратимое поглощение, происходящее по механизму, близкому к диффузии, когда между клеткой и окружающей ее

 

11-177

321

средой устанавливается равновесие в концентрации ауксина. Достижение этого равновесия зависит не только от разницы концентраций ИУК в растворе и клетке, но и от различий рН раствора и цитоплазмы. Возможно, что в поступлении ИУК. в клетку участвуют и специфические переносчики, роль которых особенно велика при рН, близком к нейтральному. Продолжи­тельность этой фазы 25—30 мин; 2) метаболическое накопле­ние. В это время ауксин связывается с различными компонен­тами клетки, чаще всего с образованием глюкозного эфира или индолил-3-ацетиласпарагиновой кислоты. Связанный ауксин не участвует в клеточной регуляции и представляет собой запас­ную форму гормона.

Физиологические эффекты ауксина связаны с его действием на клеточном уровне, которое появляется в регуляции растяже­ния, деления и дифференцировки.

Как уже отмечалось, механизм растяжения клеток под дей­ствием ауксина обусловлен активацией протонной помпы, при­водящей к подкислению клеточной стенки, и ее последующим растяжением за счет тургорного давления вакуоли.

Растяжение клеток и размягчение клеточных стенок под действием ауксин-активируемой протонной помпы может иг­рать важную роль в процессах дедифференцировки и после­дующего деления, наряду с активацией ферментов, участвую­щих в разрыхлении клеточной стенки — целлюлазы и пекти-наз.

Индукция ауксином клеточных делений также обусловлена и тем, что он создает условия, необходимые для репликации ДНК, включающие в себя стимулирование дыхания, синтеза РНК и белков.

В целом растении участие ауксина в регуляции деления клеток наиболее отчетливо проявляется в тех случаях, когда активация деления вызывается ауксином, поступающим из ме-ристематических органов. Так, весеннюю активацию камбия вызывает ауксин, поступающий из пробудившихся почек. Раз­растание завязи и цветоложа (у земляники) индуцируется аук­сином, выделяющимся из развивающихся семян. Активация де­ления клеток камбия, приводящая к образованию боковых, или адвентивных, корней, определяется повышением содержания ауксина в базальной части черенка или корня в результате базипетального транспорта.

Ауксин вызывает не только дедифференцировку. Он спосо­бен стимулировать дифференциацию меристематических или

 

 

322

дедифференцированных клеток в клетки проводящих тканей. Под действием ауксина отмечается формирование проводящих флоэмных и ксилемных элементов в каллуснои ткани, что имеет большое значение в биотехнологии и практике растениеводства.

Тропизмы, т. е. изменение положения различных органов растения, также регулируются ауксином. Механизм их обу­словлен неодинаковой скоростью растяжения клеток латераль­ных сторон осевых органов, вызванной неодинаковым содержа­нием в них ауксина.

Аттрагирующее (т. е. притягивающее) свойство ауксина оп­ределяет и такое важное в жизни растения свойство, как апи­кальное доминирование. Апекс, продуцирующий этот фитогормон, представляет собой мобилизационный центр, к которому притекают питательные вещества и другие фитогормоны (гиббереллины и цитокинины). Вследствие этого питательные веще­ства и фитогормоны практически не поступают к пазушным почкам, которые поэтому не растут или растут гораздо медлен­нее, чем верхушечная почка. Механизм аттрагирующего дейст­вия практически не изучен. Есть основания полагать, что он связан с активацией протонной помпы.

Опадение листьев, завязей и плодов также контролируется ауксинами. Пока орган в неповрежденном, активном состоя­нии, из него постоянно идет отток ауксина. Прекращение этого потока является сигналом растению о нарушении жизнедея­тельности листа, ненужности неоплодотворенной или избыточ­ной завязи, созревании плода. При этом происходит формиро­вание отделительного слоя и опадение органа.

По мнению В.В. Полевого, ауксин —один из наиболее древ­них фитогормонов. Так, известно, что даже у простейших име­ется регуляторное вещество — серотонин, очень близкое по строению с ИУК, которое выполняет функции внутриклеточного и тканевого гормонов, а с появлением нервной системы — роль нейромедиатора.

Индукция деления могла быть первичной функцией ауксина и родственных ему соединений. Затем в процессе эволюции ауксин становится фактором межклеточной и межорганной ре­гуляции: растяжения клеток, индукции образования проводя­щих пучков и корней, апикального доминирования.

Цитокининыоткрыты в 1955 г. как факторы, стимули­рующие деление клеток. Первый природный цитокинин был на­зван зеатином, так как это вещество выделено из незрелых се­мян кукурузы. Сейчас известно еще 12 других цитокининов, их химическое строение близко к строению зеатина. Показана вы-

 

323

 

сокая цитокининовая активность у дифенилмочевины и ряда ее производных:

При этом возможно, что цитокининовое действие дифенил-мочевины обусловлено следующими эффектами: ингибированием цитокининоксидазы, индукцией синтеза «настоящего» цито-кинина, способностью взаимодействовать с рецепторами цито-кинина.

В процессе эволюции этот класс фитогормонов, так же как и ауксины, начал формироваться очень рано. Цитокинины ши­роко распространены в растительном мире: от водорослей до цветковых растений. Соединения с цитокининовой активностью обнаруживаются уже у бактерий.

Цитокинины синтезируются в растении из двух главных предшественников — мевалоновой кислоты и 5'-АМФ. Возмо­жен синтез цитокининов из продуктов распада некоторых тРНК, содержащих модифицированный аденозин. При этом об­разуется неактивный цис-изомер зеатина, однако треть его спо­собна превращаться в физиологически активный транс-изомер под действием специфичной изомеразы.

Ключевой реакцией биосинтеза цитокинина является обра­зование ГМ-(0-изопентенил)аденозин-5'-монофосфата из D-изо-пентенилпирофосфата и 5'-АМФ. Фермент, осуществляющий эту реакцию, очень нестабилен, он Mg^2+-зависим, активируется Мп и блокируется Hg²⁺, а также отличается высокой специ­фичностью к 5'-АМФ.

Цитокинины синтезируются главным образом в апикальных меристемах корня, откуда активно транспортируются с пасокой по ксилеме. Скорость передвижения цитокининов поэтому го­раздо выше, чем ауксинов. Направление транспорта — акропе-тальное, особенно много цитокининов обнаруживается в актив­ных меристемах и семенах.

Стабильность цитокининов в растении невысока, время по­лураспада зеатина составляет в зависимости от вида растения и его органа от 6 до 20 ч. Скорость разрушения в молодых тка­нях ниже, чем в старых. Медленнее всего этот процесс идет в

 

324

корнях. Деструкция цитокининов начинается с конъюнгирования с сахарами (рибоза, глюкоза) и аминокислотой аланином. При этом путь образования О-глюкозидов цитокинина можно рассматривать как запасание этого гормона, а другие — как необратимую деструкцию. Недавно открыт фермент цитокининоксидаза, окисляющий цитокинин без предварительного гликозидирования. Окисление при этом происходит по месту при­соединения алифатической части к аденину.

Основной физиологический эффект цитокинина заключается в активации клеточных делений. В отличие от ауксина, создаю­щего необходимые условия для митоза, выражающиеся в дедифференцировке и репликации ДНК, т. е. в инициировании митоза, цитокинин активирует следующие стадии: работу РНК-полимераз, образование РНК и синтез белков. Возможно, что эти эф­фекты связаны с аттрагирующим действием цитокинина.

Аттрагирующее действие частично обусловливает и ряд других эффектов данного фитогормона, к числу которых можно отнести стимулирование роста клеток листьев и семядолей, снятие апикального доминирования, задержку старения листь­ев и регуляцию передвижения веществ в растении.

Стимулирование роста клеток листьев и семядолей под дей­ствием цитокинина, помимо аттракции, связано с активацией синтеза белка и ускорением использования запасных веществ. Это действие цитокинина проявляется лишь на листьях дву­дольных растений.

Значительную роль цитокинин играет и в регуляции органо­генеза. Преобладающая концентрация этих гормонов задержи­вает образование корней и ускоряет закладку стеблевых почек. Они также способны индуцировать зацветание некоторых ви­дов растений в условиях неблагоприятного фотопериода.

Под действием цитокинина покоящиеся семена и клубни ря­да культур выходят из состояния покоя. Возможно, что это свя­зано с активацией синтеза гидролитических ферментов.

Цитокинины не только задерживают старение листьев, но и регулируют формирование хлоропластов на ранних стадиях развития листа, а также их рост и деление за счет стимулиро­вания синтеза хлоропластных РНК и белков.

Цитокинины участвуют также в регуляции транспирации листьев, открывая устьица, что наряду со стимулированием формирования хлоропластов и задержкой старения листьев приводит к большей фотосинтетической активности.

Очень важным свойством цитокининов является их способ­ность повышать устойчивость клеток растения к различным не­благоприятным воздействиям — повреждающим температурам,

 

325

недостатку воды, повышенной засоленности, рентгеновскому из­лучению, фитотоксичным воздействиям иестицидов. Механизм такого защитного действия еще не совсем ясен. Однако установлено, что повышение уровня цитокининов при неблагоприят­ных условиях жизни растения стимулирует синтез стрессовых белков, защищающих клетку.

Гиббереллины были открыты (в 1926 г.) и выделены (в 1938 г.) в Японии как продуценты патогенного гриба Gibberellafujicuroi , вызывающие чрезмерный вегетативный рост риса. В середине 50-х годов была установлена их химиче­ская структура и присутствие этих веществ во многих видах растений.

Изучение гиббереллинов активно продолжается. Уже из­вестно около 70 представителей этих веществ, в том числе 45 выделены из растений. Они представляют собой терпеноиды:

Синтезируются гиббереллины в растении из мевалоновой кислоты. Начальные этапы синтеза гиббереллинов из мевало­новой кислоты до геранил-геранилпирофосфата являются об­щими для дитерпеноидов. Дальнейший синтез можно разделить на три основных этапа: образование энт-каурена; окисление энт-каурена в ГК₁₂-альдегид; окисление ГК₁₂-альдегида в раз­личные гиббереллины. Наряду с синтезом собственно физиоло­гически активных молекул гиббереллинов образуются также их многочисленные изомеры и эпимеры, слабо изученные в настоя­щее время.

 

326

Известен ряд соединений, которые способны блокировать биосинтез гиббереллинов. Практически все эти вещества обла­дают ретардантным действием, т. е. тормозящим рост. Преры­вание биосинтеза гиббереллина происходит за счет блокирова­ния определенных ферментов. Так, хлорхолинхлорид и другие четвертичные аммониевые соединения прерывают образование энт-каурена, блокируя первую стадию реакции образования каурена, происходящую в цитоплазме, в отличие от второй ста­дии, происходящей в хлоропластах. Обе стадии осуществляются одним и тем же ферментом — энт-кауренсинтазой. Триазольные вещества прерывают образование энт-кауреновой кислоты, бло­кируя три последовательные реакции окисления энт-каурена.

Большой интерес в вопросе локализации биосинтеза гиббе­реллинов. представляет тот факт, что этот процесс разделен в пространстве. Так, этапы биосинтеза до образования энт-кау­рена включительно идут в листе, после чего это вещество транспортируется в корень, где и происходят окончательные реакции, превращающие предшественник в собственно различ­ные гиббереллины. При этом образование гиббереллинов у растений, чувствительных к фотопериоду, происходит лишь при определенной длине светового дня.

Транспорт гиббереллинов не полярен. Они перемещаются акропетально и базипетально по сосудам ксилемы и флоэмы с током водных растворов. В связи с таким характером транс­порта скорость распространения этого фитогормона сравни­тельно высока.

Деструкция гиббереллинов в растительной клетке происхо­дит двумя путями. Во-первых — гидроксилирование, во-вто­рых — образование гликозидов, глкжозиловых эфиров и дру­гих соединений, не обладающих физиологической активностью. Эти пути могут заканчиваться окислением гиббереллинов.

Физиологическое действие гиббереллинов проявляется глав­ным образом в стимуляции ростовых процессов за счет усиле­ния растяжения клеток и повышения митотической активности меристематических тканей. Стимулирование растяжения кле­ток под действием гиббереллина не связано с активацией про­тонной помпы, в отличие от действия ауксинов, а обусловлено усилением синтеза материала клеточной стенки.

Молекулярный механизм повышения меристематической ак­тивности гиббереллинами не вполне ясен. Известно действие этих гормонов по сокращению S-периода митотического цикла, а также определенная пространственная ориентация индуциро­ванных гиббереллином митозов вдоль продольной оси растения.

Наблюдается определенная специфика в ростовых реакциях растений различных семейств на тот или иной гиббереллин.

327

Так, растения семейства тыквенных и некоторые крестоцветные не изменяют своего роста под действием ГК₃, но активно реаги­руют на ГК₄, который, в свою очередь, не изменяет интенсив­ность роста представителей ряда других семейств.

Помимо видовой специфичности на гиббереллин, ярко выра­жена специфичная реакция органов одного и того же растения на повышение уровня этого фитогормона. Вызывая активный рост стебля, гиббереллин практически не влияет на рост листа и угнетает рост корней. Отрицательное действие гиббереллина на корни может быть связано с перераспределением питатель­ных веществ на преимущественное развитие активно растущей надземной системы.

Дефицит гиббереллинов может определять карликовость растений. Причины карликовости в этом случае, как правило, обусловлены нарушением работы ферментативной системы биосинтеза этих фитогормонов.

Гиббереллины играют большую, но недостаточно изученную роль в процессах перехода к формированию генеративных ор­ганов и зацветанию. Показано на многолетних растениях, что повышение уровня гиббереллинов на стадии детерминации ге­неративного пути развития меристем приводит к подавлению образования генеративных органов. В то же время, снижение уровня гиббереллинов на более поздних этапах формирования элементов цветка в меристеме так же неблагоприятно сказыва­ется на генеративном развитии.

У некоторых розеточных растений обработка гиббереллином индуцирует зацветание, даже в условиях неблагоприятного све­тового дня. Это дало основания академику М.Х. Чайлахяну для представления гиббереллина как необходимой части гипотети­ческого гормона флоригена. Предполагается, что помимо гиббе­реллина в состав флоригена входят антезины — еще не выде­ленные фитогормоны.

Введение гиббереллина извне часто вызывает угнетание развития семян и формирование партенокарпических плодов. У растений с раздельнополыми цветками отмечен эффект сдвига сексуализации в сторону преобладающего формирования муж­ских цветков.

Гиббереллины способны выводить семена и клубни расте­ний из состояния покоя. Это связано с индуцированием ими синтеза ряда гидролитических ферментов, главным образом а-амилазы, расщепляющей запасной крахмал и делающий его доступным для питания зародыша.

Этилен. В 1901 г. Д.Н. Нелюбов из Петербургского уни­верситета сообщил о том, что этилен, входящий в состав све­тильного газа, стимулирует опадение листьев и нарушает фото-

 

328

тропизм проростков гороха. В 1934 г. этилен был обнаружен в газообразных выделениях хранящихся яблок. Это послужило основанием для того, чтобы считать его фитогормоном.

Этилен — единственный известный газообразный фитогор-мон очень простого строения. В растениях этилен синтезирует­ся из аминокислоты метионина (рис. 6.5).

Ключевой реакцией в биосинтезе этилена является образо­вание его непосредственного предшественника — 1-аминоциклопропан-1-карбоновой кислоты (АЦК). Представляет большой интерес тот факт, что другой фитогормон — ауксин — сущест­венно повышает активность фермента, ответственного за обра­зование АЦК. Известны и ингибиторы этого фермента: амино-оксиуксусная кислота и аминоэтоксивинилглицин. Образование этилена и АЦК подавляется ионами Со²⁺, этилендиаминтетра-ацетатом (ЭДТА), светом.

 

Дезактивация этилена, кроме выделения его в окружающую среду, происходит путем образования окиси этилена. Установ­лено, что максимальная активность этилена совпадает по вре­мени с его максимальным окислением, а искусственное прекра­щение окисления прекращает действие этого фитогормона. Все это дает возможность предполагать, что окисление этилена ка­ким-то образом связано с реализацией его фитогормональной активности.

Способностью к биосинтезу этилена обладают практически все живые клетки растения. В онтогенезе характер образования этого фитогормона резко изменяется. У ювенильного растения этилен синтезируется главным образом в меристематических тканях. В дальнейшем наибольшие количества этилена образу­ют созревающие плоды. Биосинтез этилена также резко усили­вается при травмах или стрессовых воздействиях на растение.

Как и большинство других фитогормонов, этилен обладает широким спектром регуляторных эффектов, причем даже в пределах одного растения возможны различные реакции клеток на этот фитогормон.

Этилен способен вызывать изодиа метрическое растяжение клеток (утолщение), что связано с изменением ориентации мик­ротрубочек, вследствие чего вновь синтезируемые микрофибрил­лы целлюлозы располагаются вдоль новой оси растяжения.

Ряд эффектов этилена объясняется его антиауксиновым действием. В отличие от ауксина, этилен вызывает формирова­ние отделительного слоя, т. е. приводит к опадению листьев, цветков, завязей и плодов. Это обусловлено тем, что он индуци­рует синтез ферментов эндополигалуктороназы и целлюлазы, разрушающих клеточные стенки. Под действием этилена пре­кращается индуцированное ауксином растяжение клеток, по­давляется митотическая активность. Этилен также блокирует транспорт ауксина.

Этилен не только вызывает опадение плодов, но и ускоряет их созревание. Под действием этого фитогормона повышается выход латекса у каучуконосных растений.

По-разному действует этилен на рост растений. У большин­ства растений он тормозит вегетативный рост, подавляя про­цессы деления и растяжения клеток. Однако, в ряде случаев, например, для проростков риса, повышение его концентрации приводит к активации роста.

Значительный интерес представляет защитное действие эти­лена. Как уже отмечалось, образование этилена резко увеличи­вается при стрессовых воздействиях и механических поврежде­ниях. Возможно, что это первый ответ растения на потенциаль-

 

330

 

ную опасность. Стрессовый этилен индуцирует синтез фитоалексинов (защитных веществ) и фермента хитиназы, раз­рушающего клеточные стенки патогенных грибов, а также не­которых фенольных соединений.

Кроме того, повышение уровня этилена приводит к стимуля­ции образования другого фитогормона, также принимающего участие в защитной реакции растений — абсцизовой кислоты.

Абсцизоваякислота (АБК) впервые выделена в 1964 г. из молодых коробочек хлопчатника. Она представляет собой сесквитерпен, синтезируемый в растении из мевалоновой кислоты (рис. 6.6).

Возможно также образование АБК из продуктов распада ксантофилла виолоксантина под действием света или фермен­та липоксигеназы. Это, по-видимому, объясняет резкое увели­чение данного фитогормона при стрессе. АБК синтезируется во всех органах растения. Интенсивность ее образования уве­личивается по мере старения, а также при неблагоприятных воздействиях, особенно при недостатке влаги. Наибольшее со­держание этого фитогормона в хлоропластах старых листьев, зрелых плодах, покоящихся семенах и почках. По мере созре­вания зародыш семени сам приобретает способность синтези­ровать АБК, регулируя таким образом процесс собственного покоя и устойчивости. Синтез АБК имеет четкую фоторитмич­ность, возрастая в 50—60 раз ночью в сравнении с днем. На уровень АБК стимулирующе действует снижение температуры и уменьшение в составе света синих и ультрафиолетовых квантов.

331

АБК транспортируется акропетально и базипетально по флоэме и ксилеме. Скорость передвижения довольно высока. Аттрагирующими центрами для АБК являются активно деля­щиеся меристемы. Метаболизм АБК может осуществляться че­рез образование конъюгата с сахарами (гликозидирование), ко­торое может быть обратимым и необратимым, а также окисле­нием через фазеевую кислоту.

Фитогормональные эффекты АБК весьма разнообразны. Они связаны как с ингибированием, так и со стимуляцией важней­ших физиологических процессов. Абсцизовая кислота — фитогормон с мощным ингибиторным действием. Она ускоряет распад нуклеиновых кислот, белков, хлорофилла, ингибирует активность протонной помпы. Под действием АБК закрываются устьица и прерывается фотосинтетическое фосфорилирование.

Покой семян, почек и клубней регулируется АБК. По мере созревания она накапливается в запасающих органах и семе­нах. Накопление АБК в органе приводит к тому, что основные процессы жизнедеятельности минимализируются и орган пере­ходит в состояние глубокого покоя.

Абсцизовая кислота выступает как коррелятивный ингиби­тор — фактор, блокирующий процессы роста, стимулируемые ауксинами, цитокининами и гиббереллинами.

Известен и ряд активирующих эффектов АБК: стимуляция развития партенокарпических плодов у розы и образования клубней картофеля, удлинение гипокотиля огурца, образование корней у черенков фасоли. Значительные изменения вызывает этот фитогормон и в составе запасных белков зерновых куль­тур.

Очень важна роль абсцизовой кислоты в устойчивости рас­тений к стрессу. Она, так же как и цитокинин, индуцирует син­тез стрессовых белков, в том числе и особой группы — белков синикации. Данные вещества ответственны за обезвоживание семян, что обеспечивает их покой. Растения, неспособные к син­тезу этого фитогормона, быстро погибают.

Брассиностероиды. Этот класс фитогормонов от­крыт сравнительно недавно и сейчас активно изучается. Осо­бый интерес исследователей вызывает тот факт, что брассино­стероиды—единственные известные гормоны растений стеро­идной природы. Учитывая, что у насекомых и животных стероиды играют огромную роль в процессах гормональной ре­гуляции, сведения о брассиностероидах могли бы быть очень важными для осмысления эволюции гормональных систем рас­тительного и животного царств:

 

 

332

Процессы биосинтеза и транспорта брассиностероидов сла­бо изучены. Известно, что малые количества этих фитогормонов содержат ткани цветка, листья и молодые стебли растений. Максимальная концентрация брассиностероидов отмечена в пыльце, из которой они и были впервые выделены в 1970 г.

Физиологическое действие брассиностероидов близко к дей­ствию других фитогормонов. Подобно ауксину, брассиностерои­ды стимулируют растяжение клеток, подобно гиббереллину — усиливают ростовые процессы целого растения, подобно цитокинину — стимулируют рост изолированных семядолей огурца. Брассиностероиды обладают также некоторыми факто­рами, сходными с этиленом.

Специфичным действием этих фитогормонов можно считать регуляцию роста семяпочки. Микроколичества брассиностероида, попадая с пыльцой в семяпочку, стимулируют ее развитие и образование семян.

Большой интерес вызывает недавно обнаруженный эффект стимулирования брассиностероидами устойчивости растений к стрессам и грибным заболеваниям. Причины такого действия скорее всего связаны с повышением образования стрессовых белков, а также фитоалексинов и других компонентов системы фитоиммунитета.

В настоящее время исследования брассиностероидов актив­но проводятся во многих странах в целях повышения продук­тивности и устойчивости сельскохозяйственных растений.

Другиеприродныерегуляторныесоеди­нения.Жасминовая кислота. Сообщения о жасминовой ки­слоте (ЖК) как о фитогормоне появились недавно. Ее роль в системе фитогормональной регуляции не вполне ясна, однако известно, что это вещество обладает мощным ингибиторным действием:

Под действием жасминовой кислоты резко увеличивается уровень другого фитогормона — абсцизовой кислоты. Она спо­собна также регулировать уровень этилена, стимулируя его биосинтез в молодых растущих тканях и снижая — в старых.

Жасминовая кислота индуцирует биосинтез определенных белков, функции которых до настоящего времени не известны. Этот фитогормон может также управлять активностью уже су­ществующих в клетке ферментов, например активность полифе-нолоскидаз под действием жасминовой кислоты повышается в 6—9 раз.

Действие жасминовой кислоты близко к действию АБК. В то же время отмечается различная чувствительность органов к АБК и ЖК.

Салициловая кислота. Первое сообщение о гормональном действии салициловой кислоты появилось в 1988 г., когда был установлен эффект повышения температуры пробивающего снег крокуса, контролируемый салициловой кислотой. Известен и ряд других эффектов салициловой кислоты: блокирование биосинтеза этилена на уровне его образования из АЦК, преры­вание восстановления нитратов на уровне N0, индуцирование зацветания короткодневного растения, находящегося в услови­ях длинного дня.

Олигосахариды. В настоящее время имеются многочислен­ные экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что некоторые олигосахариды, образующиеся при частичном гидро­лизе клеточных стенок растений, грибов и насекомых, обладают регуляторным действием на растения. Их действие проявляется в повышении устойчивости растений к вредоносным организ­мам за счет активации системы фитоиммунитета. Отмечено, что увеличение уровня олигосахаридов способствует усилению образования этилена в растениях. Однако до последнего време­ни остается открытым вопрос о.том, оказывают ли олигосаха­риды действие непосредственно активируя собственную систе­му ответа или индуцируемые им эффекты связаны с увеличени­ем биосинтеза этилена.

Ингибитор цветения BEHD . В конце 80-х годов большой интерес ученых всего мира вызвало открытие ингибитора за­цветания, названного BEHD. Оно представляет собой линей­ную молекулу липида с 18 углеродными атомами и нескольки­ми ненасыщенными связями. Это вещество синтезируется у длиннодневных и короткодневных растений в условиях неин­дукционного фотопериода и быстро метаболизируется при пе­реносе растений в индуктивные условия. Имеющиеся экспери­ментальные данные позволяют утверждать, что BEHD

 

334

 

 

способен играть значительную роль в переходе растений к фор­мированию генеративных орга­нов.    

Спийок фитогормонов не ис­черпывается приведенными клас­сами. Эти вещества присутствуют в растении в очень малых количе­ствах, поэтому обнаружить, выде­лить и идентифицировать их чрез­вычайно сложно, но поиски в этом направлении активно ведутся.

Высказано предположение, что фузикокцин (стероидное ве­щество), ранее известный лишь как продуцент жизнедеятельно­сти грибов, является фитогормо-ном, т. е. синтезируется в растении и регулирует ростовые процессы. Возможно существование и пептидных фитогормонов.

Взаимодействие фитогормонов в растениях. Гормоны рас­тений активно взаимодействуют. Они влияют на синтез, рспад и транспорт друг друга. Изменение уровня одного из компонен­тов фитогормональной системы неизбежно приводит к измене­ниям всей системы (рис. 6.7).

Состояние фитогормональной системы, т. е. соотношение меж­ду уровнями фитогормонов, соответствующее определенному эта­пу органогенеза, ответу на внешнее воздействие, называют гормо­нальным статусом. Гормональные статусы изучены слабо. Это объясняется трудностью количественного определения фитогормо­нов. Только недавно появились совершенные методы анализа этих веществ, и в скором времени фитогормональные статусы будут расшифрованы для многих растений. Это даст возможность более полно и направленно управлять продуктивностью растения, под­готавливать его с помощью соответствующих приемов к перенесе­нию неблагоприятных условий внешней среды.

 

 

---

Дата добавления: 2021-01-20; просмотров: 296; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!