Опыт 2. Определение концентрации глюкозы в биологических жидкостях.
Для определения глюкозы в биологических жидкостях в настоящее время различными фирмами выпускаются наборы реактивов. Поэтому суть работы сводится только к правильному использованию набора реактивов согласно инструкции по применению.
Определение без депротеинирования.
Без осаждения белков анализируют сыворотку и плазму крови, мочу. Мочу перед анализом разбавляют дистиллированной водой в соотношении от 1:10 до 1:500 и в последующем результат умножают на степень разведения.
1. Приготовьте опытную, калибровочную и контрольную пробы по схеме:
| Объем компонента (мл) | ||
опытная проба | калибровочная проба | контрольная проба | |
Рабочий раствор реактивов | 2,5 | 2,5 | 2,5 |
Исследуемый образец | 0,025 | - | - |
Калибровочный раствор глюкозы | - | 0,025 | - |
Дистиллированная вода | - | - | 0,025 |
2. Поместите пробирки в водяную баню (37оС) на 10 минут.
3. Измерьте оптическую плотность опытной (D1) и калибровочной (D2) проб против контрольной пробы при длине волны 540 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.
4. Рассчитайте концентрацию глюкозы по формуле:
где Х - концентрация глюкозы в калибровочном растворе.
Сравните полученные величины с нормальными значениями. Сделайте вывод о состоянии животного. В случае отклонения полученных значений от нормальных величин, предложите возможные причины, объясняющие данный результат.
Назовите факторы, вызывающие гипогликемию и гипергликемию в крови животных.
|
|
Опыт 3. Полуколичественное определение глюкозы в моче.
1. В ступке разотрите в тонкий порошок 1 г сульфата меди и 10 г карбоната натрия.
2. На предметное стекло насыпьте немного порошка и нанесите несколько капель мочи.
3. Подогрейте до кипения. Синий цвет означает, что глюкозы нет, желтовато-зеленый означает, что глюкозы не более 0,5 %, зеленый – не более 1%, коричнево-красный – до 2%, интенсивно красный – свыше 2%.
Запишите Ваши результаты.
Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________
Занятие № 11. «Обмен углеводов (часть 2)»
Цель занятия: сформировать знания об основных метаболических путях превращения глюкозы.
ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:
1. Гликолиз. Последовательность химических реакций и их роль в организме.
2. Гликогенолиз. Последовательность химических реакций и их роль в организме.
3. Глюконеогенез. Последовательность химических реакций и их роль в организме. Биологическая роль данного процесса.
4. Пентозный путь окисления углеводов. Охарактеризуйте стадии данного процесса. Укажите биологическое значение каждой стадии.
5. Гормональная регуляция углеводного обмена.
|
|
6. Сравните энергетический выход аэробного и анаэробного окисления молекулы глюкозы.
Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________
Экспериментальная работа.
Опыт 1. Выделение гликогена из тканей животных и качественные реакции на гликоген.
1. Взвесьте 1 г печени.
2. Поместите навеску ткани в ступку. Налейте 3 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и разотрите пестиком в течение 10 минут.
3. Затем добавьте 5 мл дистиллированной воды.
4. Полученную суспензию фильтруйте в другую пробирку.
5. Повторите пункт 2-5 с мышечной тканью.
6. С полученными фильтратами проведите нижеследующие реакции:
Сульфат аммония (насыщ.) 10 капель | Ацетат свинца 10 капель | раствор Люголя 1 капля | |
Экстракт печени (0,5 мл) | |||
Экстракт мышечной ткани (0,5 мл) |
Объясните полученные результаты. Как Вы думаете, в эксперименте использовалась печень сытого или голодного животного? Обоснуйте свое предположение. Почему гликоген мышц не может быть использован в качестве прямого источника глюкозы крови?
Опыт 2. Обнаружение активности дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида.
|
|
1. В пробирку внесите кусочек дрожжей (величиной с горошину) и 1 мл 2%-ного раствора глюкозы.
2. Разотрите содержимое стеклянной палочкой до получения равномерной взвеси.
3. Добавьте каплю 0,002%-ного раствора метиленового синего и перемешайте содержимое пробирки стеклянной палочкой.
4. Пробирку поместите в штатив и, через некоторое время, наблюдайте постепенное обесцвечивание метиленового синего. Обесцвечивание начинается со дна пробирки.
Объясните механизм обесцвечивания содержимого пробирок.
Напишите реакцию окисления 3-фосфоглицеринового альдегида в ходе гликолиза. Каким образом окисляется НАДН+Н+ дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида в анаэробных условиях?
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 593; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!