Опыт 5. Реакции осаждения белков.
А) Обратимое осаждение белков сернокислым аммонием (высаливание).
1. В пробирку налейте 0,5 мл раствора яичного белка.
2. Добавьте равный объем насыщенного раствора сернокислого аммония.
Объясните причину выпадения осадка.
3. К раствору с осадком белков добавьте равный объем дистиллированной воды, перемешайте.
Почему наблюдается постепенное исчезновение осадка белков?
б) Осаждение белков при кипячении.
1. Возьмите четыре пробирки. В каждую налейте по 0,5 мл раствора белка.
2. Первую пробирку оставьте без изменений, во 2-ю добавьте 1 каплю 1%-ной уксусной кислоты, в 3-ю – 5 капель 10%-ной уксусной кислоты, в 4-ю – 5 капель 10% гидроксида натрия.
3. Содержимое всех пробирок поставьте на 5 мин в кипящую водяную баню.
4. Сравните характер изменения растворов после нагревания.
Запишите в таблицу результаты осаждения белков при кипячении в различных средах (отметьте положительный результат осаждения плюсом, а отрицательный - минусом) и укажите в каждом случае причины появления или отсутствия осадка белка.
| Нейтральная среда | Слабокислая среда | Сильнокислая среда | Щелочная среда | |
| Результат осаждения | ||||
| Причина выпадения осадка |
В) Осаждение белков солями тяжелых металлов, концентрированными минеральными кислотами, органическими растворителями.
1. Возьмите три пробирки.
|
|
|
2. В каждую налейте по 0,5 мл раствора белка.
3. В первую пробирку добавьте 0,5 мл 5%-ного раствора уксуснокислого свинца, во 2-ю – 0,5 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ), в 3-ю – 0,5 мл ацетона.
Результаты реакций осаждения белков запишите в таблицу:
| Название веществ, осаждающих белки | Характер и цвет осадка | Чем обусловлена реакция и ее особенности |
Опыт 6. Определение изоэлектрической точки белка (демонстрационный).
1. Возьмите 7 пробирок одинакового диаметра.
2. Насыпьте в каждую пробирку меркой по 1 мл измельченного в порошок желатина.
3. Прилейте в каждую пробирку по 10 мл буферного раствора с определенной величиной рН (см. таблицу).
| рН буферного раствора | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 0,2 М р-р КН2РО4 (мл) | – | 2 | 4 | 5 | 7 | 8 | 10 |
| 0,1 М р-р лимонной к-ты (мл) | 10 | 8 | 6 | 5 | 3 | 2 | – |
Через 15-20 мин измерьте высоту каждого столбика набухшего желатина. Постройте график зависимости степени набухания от величины рН и определите изоэлектрическую точку желатина (рI). Объясните, почему вы так решили?
|
|
|
|
|
|
Дата выполнения _______Балл _______Подпись преподавателя ____________
Занятие № 4. «Ферментный катализ»
Цель занятия: Сформировать знания о природе, свойствах и механизмах действия ферментов.
Вопросы к контрольной работе:
1. Ферменты: классификация и номенклатура.
2. Отличие ферментов от неорганических катализаторов: термолабильность, влияние рН на активность, специфичность. Особенности ферментного катализа. Чем объяснить, что в качестве биологических катализаторов природой избраны именно белки?
3. Механизм ферментного катализа. Фермент-субстратный комплекс. Каким образом ферменты снижают энергию активации химических реакций?
4. Строение ферментов: апофермент, кофермент, каталитический центр, аллостерический центр и их биохимическое значение. Какие вещества относят к числу коферментов?
5. Активность ферментов. Активаторы и ингибиторы ферментов. Механизм их действия. Типы ингибирования ферментов.
|
|
|
6. Способы регулирования скоростей ферментативных реакций и направленности биохимических процессов. Понятие о проферментах, изоферментах, мультиферментных комплексах и их роли в метаболизме.
Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________
Экспериментальная работа.
Опыт 1. Термолабильность ферментов.
1. Пронумеруйте три пробирки и налейте в них по 1 мл раствора амилазы.
2. Для получения раствора амилазы предварительно ополосните рот дистиллированной водой. Затем наберите в рот приблизительно 20-25 мл дистиллированной воды. В течение 15 секунд тщательно полощите рот. Полученный раствор амилазы соберите в стаканчик и используйте для дальнейших опытов.
3. Слюну в пробирке №1 прокипятите в течение 2-х минут в кипящей водяной бане.
4. Затем во все пробирки добавьте по 1 мл 1%-ного раствора крахмала.
5. Пробирки №1 и 2 поставьте в водяную баню (37°С) на 10 минут.
6. Пробирку №3 погрузите на 10 минут в лед.
7. По истечении указанного времени во все пробирки добавьте по 1 капле реактива Люголя или раствора йода. Результаты опыта занесите в таблицу:
| № проб. | Субстрат | Фермент | Условия инкубации | Окраска с йодом |
Объясните результаты эксперимента. Что показала бы реакция с йодом в пробирке № 3, если бы Вы поместили её затем в водную баню при 37оС на 10 минут?
Опыт 2. Влияние рН среды на активность фермента.
1. Пронумеруйте три пробирки.
2. Налейте в каждую пробирку по 1 мл буферных растворов с различным значением рН (4,0; 7,0; 9,0).
3. Во все пробирки добавьте по 1 мл раствора амилазы и по 1 мл 1%-ного раствора крахмала, инкубируйте в водяной бане (37°С) 10 мин.
4. Затем в каждую пробирку добавьте по 1 капле реактива Люголя или раствора йода. Результаты наблюдений занесите в таблицу:
| № проб. | Субстрат | Фермент | рН среды | Условия инкубации | Окраска с йодом |
Объясните полученные результаты и сделайте вывод относительно оптимума рН амилазы.
Опыт 3. Специфичность ферментов.
1. Пронумеруйте 4 пробирки.
2. В 1-ю и 2-ю пробирки налейте по 1 мл 1%-ного раствора крахмала, в 3-ю и 4-ю пробирки – по 1 мл 1%-ного раствора сахарозы.
3. В 1-ю и 3-ю пробирки добавьте по 1 мл разбавленной слюны, во 2-ю и 4-ю пробирки – по 1 мл раствора сахаразы.
4. Содержимое пробирок инкубируйте 10 минут в водяной бане при 37° С.
5. Затем в 1-ю и 2-ю пробирки добавьте по 1 капле реактива Люголя или раствора йода.
6. C 3-ей и 4-ой пробиркой проведите реакцию Троммера, для чего в каждую из двух пробирок добавьте по 0,5 мл 10%-ного раствор гидроксида натрия и 2 капли 2%-ного раствора сульфата меди. Нагрейте пробирки до кипения (не кипятите!).
7. Наблюдения запишите в таблицу:
| № проб. | Субстрат | Фермент | Условия инкубации | Окраска с йодом | Окраска с реакцией Троммера |
| - | |||||
| - | |||||
| - | |||||
| - |
Объясните полученные результаты и сделайте вывод относительно специфичности изученных ферментов. Какие виды специфичности вы знаете?
Опыт 4. Изучение влияния активаторов и ингибиторов на активность ферментов.
1. Пронумеруйте три пробирки.
2. В 1-ю пробирку налейте 1 мл дистиллированной воды, во 2-ю – 1 мл 1%-ного раствора хлористого натрия, в 3-ю – 1 мл 1%-ного раствора сульфата меди.
3. Во все пробирки налейте по 1 мл свежеприготовленного 1%-ного раствора крахмала и по 1 мл разбавленной слюны.
4. Содержимое пробирок инкубируйте 10 минут в водяной бане (37оС).
5. Затем во все пробирки добавьте по 1 капле реактива Люголя или раствора йода. Наблюдения занесите в таблицу:
| № проб. | Субстрат | Фермент | Добавленное вещество | Условия инкубации | Окраска с йодом |
Сделайте вывод о влиянии изученных веществ на активность амилазы.
Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 413; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!