Активности сока поджелудочной железы
За сутки у человека выделяется 1,5–2,0 л панкреатического сока рН 7,8–8,5.
В состав панкреатического сока входят протеолитические (трипсиноген, химотрипсиноген, прокарбоксипептидазы А и В, проэластаза), липолитические (липаза, фосфолипаза А и эстераза), амилолитические (a-амилаза, мальтаза) ферменты и нуклеазы (рибонуклеаза и дезоксирибонуклеаза), расщепляющие белки, жиры, углеводы и нуклеиновые кислоты. Протеолитические ферменты секретируются в виде проэнзимов. Под влиянием энтерокиназы двенадцатиперстной кишки трипсиноген превращается в трипсин, который активирует и другие пропептидазы. Панкреатическая липаза активна в присутствии солей желчных кислот.
Для работы необходимы: водяная баня или термостат, спиртовка, штатив с пробирками, бюретки, сок поджелудочной железы, желчь, фибрин, крахмал – вареный и сырой, масло растительное, фенолфталеин, раствор Люголя, бромная вода (4%-ный раствор брома в воде), 0,01 н. раствор NаОН, стеклограф. Вместо сока поджелудочной железы можно использовать панкреатин (1 г растворяют в 250 мл 0,3%-ного раствора NаНСО3), но активность его ферментов может быть ниже, чем у натурального сока поджелудочной железы.
Проведение работы. Нумеруют девять пробирок и в каждую наливают по 2 мл активированного поджелудочного сока (активацию поджелудочного сока в условиях лаборатории проводят добавлением к нему кишечного сока или соскоба слизистой оболочки кишечника). Затем в первую пробирку опускают кусочек фибрина; содержимое второй кипятят, охлаждают и опускают в нее кусочек фибрина; в третьей подкисляют поджелудочный сок соляной кислотой и добавляют кусочек фибрина; в четвертую добавляют 2 мл вареного крахмала; в пятую – щепотку сырого крахмала; поджелудочный сок в шестой пробирке кипятят, охлаждают и добавляют 2 мл вареного крахмала; в седьмую добавляют 0,3 мл желчи и 2 мл растительного масла; в восьмую – 2 мл растительного масла; поджелудочный сок в девятой кипятят и добавляют 0,3 мл желчи и 2 мл растительного масла. Все пробирки помещают на 30 мин в термостат или водяную баню при температуре 38–40 оС.
|
|
|
После прогревания пробирки охлаждают и проводят следующие реакции. К содержимому первых трех пробирок добавляют бромную воду, которая в присутствии аминокислот (триптофан) дает красновато-фиолетовое окрашивание; отсутствие окрашивания указывает на то, что фибрин не переваривается. В четвертую, пятую и шестую пробирки добавляют по 1–2 капли раствора Люголя и определяют присутствие крахмала. Амилолитические ферменты поджелудочного сока расщепляют вареный и сырой крахмал, но сырой крахмал расщепляется медленнее. Это можно установить, если пробирки с поджелудочным соком и крахмалом выдерживать в термостате по 10, 20 и 30 мин. Содержимое седьмой, восьмой и девятой пробирок титруют 0,01 н. раствором NаОН в присутствии индикатора фенолфталеина и по количеству раствора, затраченного на титрование каждой пробы, судят о липолитической активности поджелудочного сока.
|
|
|
Результаты работы и их оформление. Составьте таблицу и внесите в нее результаты опыта.
| № про-бирок | Содержимое пробирок | Время термостатирования, мин | Реактив | Результаты опыта |
| Сок поджелудочной железы + фибрин | Бромная вода | |||
| Прокипяченный сок подже-лудочной железы + фибрин | То же | |||
| Продолжение | ||||
| Подкисленный сок поджелудочной железы + фибрин | То же | |||
| а) сок поджелудочной же-лезы + вареный крахмал; б) то же; в) то же | Раствор Люголя То же То же | |||
| а) сок поджелудочной же-лезы + сырой крахмал; б) то же; в) то же | Раствор Люголя То же То же | |||
| Прокипяченный сок поджелудочной железы + вареный крахмал | ||||
| Сок поджелудочной железы + желчь + растительное масло | 0,01 н. NаОН + фенолфталеин | |||
| Сок поджелудочной железы + растительное масло | То же | |||
| Прокипяченный сок поджелудочной железы + рас-тительное масло + желчь | То же |
|
|
|
Проанализируйте результаты опыта и сделайте выводы о влиянии сока поджелудочной железы на белки, жиры и углеводы; о его ферментативной активности в различных экспериментальных условиях.
Р а б о т а 6
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 31; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!