Принципы количественного определения ферментов. Примеры. Единицы активности.
Ввиду того, что ферменты в тканях присутствуют в ничтожно малых концентрациях, мерой активности ферментов служит скорость исчезновения субстрата или нарастания конечного продукта реакции в единицу времени.
Для выражения концентрации ферментов Комиссией по ферментам Международного биохимического союза предложена стандартная единица (Е). За международную единицу активности фермента принимается количество фермента, способное превратить один микромоль (мкМоль) субстрата за 1 минуту в стандартных условиях( при 25С, оптимуме рН и концентрации субстрата, превышающей концентрацию насыщения), выражается в Мкмоль/мин
Удельная активность фермента –количество фермента в мг, способное превратить 1 мкмоль субстрата за 1 мин в стандартных условиях, выражается в мкмоль/мин*мг(белка)
В соответствии с единицами измерения, принятыми в системе СИ, введена также единица каталитической активности ферментов КАТАЛ( Kat , кат) – количество фермента, способное осуществить превращение 1 моль субстрата в 1 с в стандартных условиях.
Методы сухой химии. Иммобилизованные ферменты-компонент аналитических систем одноразового использования( диагностические полоски)
Получение иммобилизованных ферментов, или нерастворимых ферментов ( искусственно полученного комплекса фермента с нерастворимым в воде носителем ), значительно расширило сферу применения биокатализаторов. Различают иммобилизацию ковалентную и нековалентную ( иммобилизацию физическими методами)
|
|
|
Первый тип основан на ковалентном связывании фермента с нерастворимым материалом или молекул фермента между собой с образованием нерастворимых полиферментных комплексов.
Нековалентная иммобилизация включает: адсорбцию, включение в гели, микроинкапсулирование; в данном случае отмечается способность фермента диссоцииировать на субъединицы с последующим переходом в раствор не связанных с носителем субъединиц и падением активности фермента.
Главным отличительным признаком химических методов иммобилизации является то, что путем химического взаимодействия на структуру фермента в его молекуле создаются новые ковалентные связи, в частности между белком и носителем. Препараты иммобилизованных ферментов, полученные с применением химических методов, обладают по крайней мере двумя важными достоинствами. Во-первых, ковалентная связь фермента с носителем обеспечивает высокую прочность образующегося конъюгата. При широком варьировании таких условий, как рН и температура, фермент не десорбируется с носителя и не загрязняет целевых продуктов катализируемой им реакции. Это особенно важно при реализации процессов медицинского и пищевого назначения, а также для обеспечения устойчивых, воспроизводимых результатов в аналитических системах. Во-вторых, химическая модификация ферментов способна приводить к существенным изменениям их свойств, таких как субстратная специфичность, каталитическая активность и стабильность.
|
|
|
Применение в медицине
· Использование аналитических систем одноразового использования с иммобилизованными на них ферментами
· Создание протезов кровеносных сосудов и сердечных клапанов из тромборезистентного материала на основе полимеров с иммобилизовнными на них тромболитическими ферментами
· Использование иммобилизованных терапевтических белков в экстракорпоральных реакторах( уреазы,фенилаланиламмиаклиазы – в лечении почечной недостаточности, фенилкетонурии)
Дата добавления: 2019-07-17; просмотров: 363; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!