ГЛУБОКОЕ ЗАМОРАЖИВАНИЕ СПЕРМЫ 12 страница

При организации искусственного осеменения коров непосредственно в местах содержания в стойлах при при­вязном их содержании обязательным является применение асептического способа осеменения и комплекта для рабо­ты техника по искусственному осеменению животных.

РАБОТА СО СПЕРМОЙ В ХОЗЯЙСТВАХ

Работа со спермой требует особой внимательности и строгого соблюдения условий, предписываемых инструк­цией по искусственному осеменению коров и телок.

На спермиев неблагоприятно влияют различные фак­торы внешней среды.

Прямые солнечные лучи убивают спермиев, поэтому работать следует при рассеянном дневном или искусствен­ном свете.

Изменения температуры выше 42 °С и ниже О °С яв­ляются опасными для спермиев. Сперму следует хранить при постоянной температуре —79...—196 °С, не допуская резких колебаний.

Недопустимо попадание в сперму воды, в связи с чем необходимо использовать только сухую, чистую, гермети­чески закрываемую посуду.

При работе со спиртом необходимо следить, чтобы ин­струменты и посуда после- обеззараживания спиртом были просушены и протерты сухой стерильной салфеткой.

В лаборатории запрещается хранить медикаменты и дезинфи­цирующие средства, не предусмот­ренные для работы со спермой.

Сперму для использования до­ставляют с племпредприятия и хра­нят при низких температурах (— 79... —196 °С) в жидком азоте или в твердой углекислоте в специальных сосудах Дыоара.

Нельзя допускать преждевре­менного оттаивания спермы и по­вторного ее замораживания. По­вышение температуры при пере­кладывании расфасованной спермы из стационарного хранилища в транспортный сосуд Дьюара или из одного сосуда в другой может ока­зывать отрицательное воздействие на ее качество, если время подогрева будет превышать 10 секунд.

При отборе спермы техник извлекает дозу спермы из сосуда Дьюара в защитных очках и перчатках.

Оттаивание спермы на пункте ведут в такой последова­тельности:

— готовят микроскоп, проконтролировав и восстановив чистоту линз, а также отрегулировав освещенность;

— готовят прибор для оттаивания спермы, доводя тем­пературу до 38...40 °С, для этой цели удобно пользоваться микротермостатом МТ-1,2 (см. рис. 40); если оттаивание проводится при температуре 100°, готовят сосуд с кипящей водой емкостью 2...3 литра и прибор для оттаивания спер­мы этим методом;

— одной рукой поднимают канистру со спермой до верхнего края горловины сосуда и берут охлажденным пинцетом спермодозу, которую спустя 5 секунд переносят в ванну с водой;

— оттаивают при легком покачивании в течение 8...10 секунд при температуре 38...40 °С до момента, когда внут­ри упаковки остается тонкий стерженек льда;

— проверяют герметичность дозы путем легкого сдавливания ее между пальцами.

Сверхбыстрый способ оттаивания осуществляют при использовании соответствующего устройства (рис. 47) (Осташко, Бугров, 1982). Этот способ может быть исполь­зован лишь для спермодоз, имеющих герметическую обо­лочку.

Устройство состоит из стакана емкостью 100 мл (2) с донным калиброванным отверстием 6 мм (3) и сеткой на дне (4). Стакан имеет ручку (5) для его поднятия над по­верхностью водяной бани (Г). Сперму размораживают так: пинцетом извлекают из канистры сосуда Дьюара облицо­ванную гранулу (6) и погружают в стакан, заполненный до краев кипящей водой. Одновременно стакан поднимают за ручку над поверхностью емкости, и вода через донное от­верстие вытекает в течение 7 секунд. После этого пинце­том извлекают упаковку спермы. Использование такого способа позволяет получить хорошие результаты ошгодо-творяемости даже при содержании в дозе 5 и 2,5 млн ак­тивных спермиев (Осташко, Киреева, Бугров, Звозчик, 1984).

Одним из основных условий высокой оплодотворяе-мости животных является высокое санитарное и биологи­ческое качество спермы производителей. Требования к ее качеству изложены в таблице 19. В настоящее время вся заготавливаемая на племпредприятиях, спермопродукция согласно действующей инструкции и ГОСТу подвергается бактериологическому контролю.

Современные технологии заготовки спермы в различ­ных упаковках не позволяют предохранить спермопродук-цию от микробного загрязнения при заготовке, длитель­ном хранении и транспортировке. Существенным пре­имуществом Харьковской технологии является то, что по­лучение, обработка и криоконсервация спермы проводятся в закрытой системе асептически, что позволяет получать конечный продукт практически без микрофлоры и сохра­нять его таким независимо от сроков и санитарного со­стояния окружающей среды.

Проверка качества спермы перед каждым осеменением является строго обязательным требованием. Известны слу­чаи, когда в течение длительного времени осеменение жи­вотных в хозяйстве велось мертвой спермой, погибшей в результате испарения жидкого азота, что было не сразу замечено, ибо качество спермы в этом хозяйстве не кон­тролировалось. Основной лабораторный показатель спер­мы высокого качества — прямолинейно-поступательное движение спермиев. Различают и другие виды движения: манежные — движение спермиев по кругу, колебательные

— спермий изгибается на месте, не перемещаясь вперед,

— хвостовой частью вперед. Такие спермин относятся к неактивным.

Подвижность спермиев оценивают при температуре 38 °С под микроскопом с обогревательным столиком (например, МБИ-1) или с термостатом для микроскопа. Используемые при этом предметные и покровные стекла необходимо по­догревать до 38 °С и хранить на обогревательном столике микроскопа.

После подготовки микроскопа к работе и установки освещения (светло-серое неяркое освещение устанавли­вается при помощи диафрагмы и конденсора) готовят спермодозу для исследования. Сперму, замороженную в облицованных гранулах, оценивают по способу Ф.И. Осташко, М.П. Павленко и др. (1988).

Для улучшения четкости микроскопирования и повы­шения прозрачности спермодозы создают единую опти­ческую систему, для чего предварительно смазанный тон­ким слоем вазелинового масла участок спермодозы фикси­руют между двумя предметными стеклами специального устройства (рис. 48), которое устанавливают на предмет­ный столик микроскопа.

При оценке спермы, законсервированной в ампулах или пайеттах, последние хорошо встряхивают, вскрывают, на предметное стекло наносят кашпо спермы, покрывают ее покровным стеклом и исследуют под микроскопом.

Замороженную сперму в открытых гранулах исследуют после ее оттаивания в растворе цитрата натрия.

Процент прямолинейно-поступательно движущихся спер-миев определяют под микроскопом по 10 балльной шкале глазомерно при увеличении в 120...300 раз. Каждый балл этой шкалы соответствует 10 % спермиев. Замороженную сперму используют для осеменения если подвижность (активность) спермиев не ниже 4 баллов.

При всех способах хранения в дозе спермы одного осе­менения коровы или телки должно содержаться 5... 15 млн подвижных (активных) спермиев.

Племенное предприятие в своем ордере на отпущен­ную сперму указывает объем дозы, концентрацию и ак­тивность спермиев в дозе, дату ее криоконсервации, а также оплодотворяемость в %.

 

ВЫБОРКА ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ОСЕМЕНЕНИЯ

Оптимальное время осеменения животных зависит от стадии полового цикла. Под половым циклом подразуме­вают связанный с размножением периодически повто­ряющийся комплекс морфофизиологических процессов, протекающих в организме самки. Продолжительность по­лового цикла от начала одной течки и охоты до другой у коров составляет в среднем 18...21 день с колебаниями от 12 до 30 дней. По характеру нервных процессов половой цикл делят на три стадии: возбуждение, торможение и уравновешивание. Стадия возбуждения характеризуется последовательной сменой следующих феноменов:

Течка: характеризуется усилением функционирования всех отделов половых органов, выделением слизи из поло­вой щели животного, набуханием и покраснением слизис­той оболочки преддверия влагалища и влагалищной части шейки матки. В период течки канал шейки матки открыт и через него вначале выделяется небольшое количество прозрачной слизи, затем слизь становится стекловидно-прозрачной, обильно, шнурами выделяется из влагалища. К концу течки количество слизи уменьшается, она за­густевает и мутнеет. Продолжительность течки 2,5...3 и более суток. По мере усиления признаков течки проявля­ются и все остальные феномены: половое возбуждение, охота и овуляция.

Половое возбуждение: проявляется в беспокойстве жи­вотного. Оно часто мычит, ложится, поднимает хвост, за­метно снижает удой, молоко приобретает свойства моло­зива и оказывает заметное послабляющее действие при скармливании телятам. Животные в состоянии полового возбуждения прыгают на других самок, проявляя обнима-тельный рефлекс, но не допускают прыжков на себя. Про­должительность полового возбуждения колеблется от 24 до 36 часов.

Половая охота: положительная реакция самки на самца. Во время половой охоты признаки полового воз­буждения выражены наиболее ярко. Коровы и телки в охоте допускают на себя садку самца и прыжки других коров — рефлекс неподвижности. Фолликул яичника уве­личивается в начале половой охоты. При пальпации он имеет плотную тугую консистенцию, а во второй половине охоты отмечается его флюктуация. Длится охота у коров в среднем 12...16 часов, причем продолжительнее и лучше проявляется в летний период.

Овуляция: выход яйцеклетки из фолликула происходит у коров через 10... 15 часов после окончания охоты. Яйце­клетка способна к оплодотворению в течение 10...12 часов после овуляции.

Стадия торможения: характеризуется обратным разви­тием явлений, имеющих место в стадии возбуждения. В это время в яичнике на месте лопнувшего фолликула раз­вивается желтое тело. Снижается секреторная деятель­ность слизистых желез матки, полузакрытый канал шейки матки заполняется густым мутным цервикальным секретом. В этой стадии самка старается уйти от других живот­ных, в том числе и от быка, не допускает прыжков на се­бя. Сменяется эта стадия стадией уравновешивания, кото­рая продолжается до начала стадии возбуждения. В яични­ке в' это время формируются фолликулы и атрезируются желтые тела. Матка отчетливо реагирует на ее пальпацию сокращением. Животное ведет себя спокойно. У самок нормальный аппетит, они пасутся и восстанавливают мо­лочную продуктивность.

Оптимальным временем осеменения самок является период, наиболее благоприятный для встречи спермиев с яйцеклеткой. Поэтому, чтобы определить сроки введения спермы, необходимо учитывать все признаки полноценно­го полового цикла животного. Самым точным признаком готовности самки к спариванию и оптимальным сроком осеменения является конец половой охоты.

Для выявления самок в охоте используют несколько способов: визуальный, рефлексологический, визуально-рефлексологический, вагинальный, ректальной пальпации яичника, электрометрический, лабораторный.

Визуальный способ основан на обнаружении измене­ний в поведении коровы или телки. Обращают внимание на то, что у коровы в охоте подавлен пищевой рефлекс, жвачка отсутствует, акт жевания проявляется после со­кращения рубца и отрыжки. Корова стоит неподвижно и около нее находится несколько других коров, которые беспрепятственно вспрыгивают на нее, проявляя обнима-тельный рефлекс и совокупительные движения. Визуаль­ный метод имеет следующие недостатки: невозможность выборки животных с арективным циклом, с больными и ослабленными конечностями, из-за чего они не позволяют на себя вспрыгивать.

Рефлексологический способ основан на применении быка-пробника, который, находясь в стаде, не только вы­являет коров в охоте, но и стимулирует их. Пользуются этим методом так: утром и вечером коров выпускают в загон вместе с быком-пробником, который длительное время может находиться возле коров в охоте, не обращая внимания на других животных. Выявленных таким спосо­бом коров отделяют. Зимой или в плохую погоду пробника медленно проводят мимо коров, задерживая около живот­ных, у которых по клиническим признакам возможна охо­та и смотрят за его реакцией. При пользовании этим спо­собом необходимо соблюдать технику безопасности, как при работе с быками-производителями. К недостаткам этого метода следует отнести: большую трудоемкость и

опасность травматизма пер­сонала; ошибки за счет животных с больными ко­нечностями, не допуска­ющими садку быка-проб­ника.

Вагинальный способ — осмотр влагалища и шей­ки матки при помощи вла­галищного зеркала. При этом наблюдаются харак­терные признаки половых путей самки; набухшая и покрасневшая слизистая оболочка влагалища, канал шейки матки расслаблен, из него вытекает слизь, которая накап­ливается на дне влагалища, а затем самотеком вытекает из половой щели.

Способ ректальной пальпации яичника — при исследо­вании прощупывают яичники, сначала правый, а затем левый. Зрелый фолликул четко выступает на поверхности яичника в форме пузырька размером 1,5...2,0 см. При осторожном надавливании на него ощущается зыбление (флюктуация), стенки фолликула мягко вдавливаются (зре­лость фолликула), значит, до овуляции осталось 6...12 ча­сов (срок осеменения). Незрелый фолликул незначительно выступает на поверхности яичника и твердый. Вагиналь­ный способ и выбор времени осеменения животных по степени развития фолликулов более точные, но они трудо­емкие и требуют специальных знаний и навыков.

Электрометрический способ основан на измерении электрического сопротивления слизистой и пробки церви­кального канала специальными приборами. Время макси­мального выделения слизи сопровождается понижением ее электрического сопротивления и часто совпадает с опти­мальным временем осеменения.

Порядок исследований: после туалета наружных поло­вых органов из канала шейки матки рукой в стерильной полиэтиленовой перчатке берут пробу цервикального сек­рета объемом 1...5 мл. Пробы помещают в чашки Петри и оставляют на 10...15 минут. После этого в трех различных точках делают замеры (например, с помощью прибора ИИП-2М). Если показания прибора выше, чем при изме­рении контрольного раствора — 12 ММО и ярко выражена половая охота, считают, что достаточно однократного осе­менения. Если весь комплекс выражен недостаточно, осеменение проводят спустя 4... 10 часов без повторного кон­троля электропроводности.

Визуально-рефлексологический способ основан на про­верке данных исследования визуальным методом с по­мощью рефлексологического. При этом животных с приз­наками общего возбуждения выделяют в отдельную груп­пу, где с помощью быка-пробника уточняют наличие охо­ты. После этого в стадо, из которого удалены животные в охоте, впускают быка-пробника и выявляют самок с ареак-тивным циклом. Недостатком метода является трудоем­кость и возможность ошибки за счет животных с больны­ми конечностями.

Гормональный метод — метод установления оптималь­ного момента осеменения коров основан на определении в молоке растелившихся или осемененных коров концент­рации прогестерона. Принцип анализа основан на том, что желтое тело яичника коровы прекращает вырабатывать прогестерон на 18...19-й день полового цикла, считая от предыдущей охоты. В то же время у стельных коров проге­стерон вырабатывается непрерывно. При этом уровень прогестерона в молоке, как правило, высокий во время лютеальной фазы цикла и низкий в течение периода поло­вого возбуждения (рис. 49).

Определение концентрации прогестерона легко осу­ществляется методом постановки твердофазной пробы иммуноферментного анализа "ELISA — enzyme linked immunosorbent assay" с помощью специального комплекта РО-19, выпускаемого греческой фирмой "Биометрия". По­становка этой пробы позволяет определить раннюю бере­менность, начиная с 19-го дня после осеменения, опти­мальное время осеменения, а также контролировать уро­вень эмбриональной смертности и время запуска коровы на сухостой. Эта проба дает 100 % правильных показаний при низкой концентрации прогестерона — небеременные — и 96 % — при высокой.

Голландский вариант прогестероновой пробы (Van der Mei, 1993) отличается простотой и выполняется непосред­ственно в скотном дворе. Реакция протекает при комнат­ной температуре в течение 5 минут. Для ее постановки используется специальный биосенсор одноразового при­менения. В его чашечку надаивается 4...5 мл молока непо­средственно из соска. После хорошего встряхивания и простых манипуляций для перемешивания реагентов с молоком по изменению цвета индикатора выявляют коров подлежащих осеменению (рис. 50).

Нами разрабатывается для этих целей биосенсор мно­горазового применения, способный регистрировать уро­вень прогестерона в молоке при погружении в него специ­альных электродов. Кроме того, разработана проба имму­ноферментного анализа молока на содержание в нем эстрон-сульфата. По результатам этого анализа можно су­дить о наличии в организме коровы живого плода.

 

МЕТОДЫ И ТЕХНИКА ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ

Практика искусственного осеменения сельскохозяй­ственных животных использует три метода осеменения: влагалищный, когда сперму вводят во влагалище самки, цервикальный — сперму вводят в канал шейки матки и маточный — сперму вводят непосредственно в матку. У крупного рогатого скота наиболее широко применяется цервикальный метод, иногда маточный и почти не приме­няется влагалищный, который требует во много раз боль­шего количества спермы, чем упомянутые. При церви-кальном осеменении, как правило, используются три спо­соба: мано-, ректо- и визо-цервикальный, техника выпол­нения которых описана ниже.

Качество работы при искусственном осеменении жи­вотных является оцределяющим фактором, от которого зависит зооветеринарная и экономическая эффективность животноводческой фермы, что выдвигает высокие требо­вания к комплектации ферм специалистами по репродук-тологии и надлежащего их обеспечения.

Независимо от способа искусственного осеменения все животные с признаками полового возбуждения подверга­ются клинико-гинекологическому обследованию для исключения больных и беременных, а также для определе­ния оптимального времени и способа осеменения.

Независимо от выбранного способа оператор обязан осеменять коров и телок в манеже на пунктах или в спе­циально оборудованном месте для работы в полевых усло­виях В последнем случае рекомендуется использовать "Портативный комплект для работы оператора в полевых условиях" (рис. 51).

Осеменять можно только клинически здоровых живот­ных после осмотра ветеринарным специалистом-гинекологом, коров — в первую после отела охоту (18...28-й день). Жи­вая масса телок должна быть не ниже 3/4 живой массы стандарта породы.

После осеменения животное выдерживают на привязи или в стойле до прекращения половой охоты. В случае продолжения охоты более 12 часов после осеменения жи­вотное необходимо показать ветеринарному врачу и по его рекомендации осеменить повторно. Осеменять больных животных можно только после выздоровления с разреше­ния ветеринарного врача, о чем должна быть сделана со­ответствующая запись в гинекологическом журнале. Под­лежат ветеринарному обследованию также коровы, не пришедшие в охоту через 30...45 дней после отела.

На 19-й день после осеменения у животных берут про­бы молока или кровь и исследуют концентрацию проге­стерона иммуно-ферментным методом, а через 60...75 дней их подвергают ректальному исследованию на стельность. Неоплодотворенные животные по заключению ветеринар­ного специалиста подвергаются лечению, им назначают соответствующее кормление и режим содержания. Кроме повседневного контроля за состоянием коров после отела до их оплодотворения два раза в год (перед выводом в ла­геря и постановкой на стойла) проводят диспансеризацию поголовья зооветеринарной комиссией. Комиссия оцени­вает воспроизводительную способность каждой коровы, составляет план мероприятий по улучшению воспроизвод­ства стада в целом по хозяйству и производит выбраковку непригодных к воспроизводству животных.

---

Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 154; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!