Определение жизнеспособности плероцеркоидов

⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 3Следующая ⇒

Определение жизнеспособности плероцеркоидов проводят при оценке эффективности обеззараживания рыбы. Извлечённые из органов и тканей рыбы плероцеркоиды могут быть неподвижными. Их помещают в подогретый физиологический раствор или желудочный сок, осторожно раздражая личинку препаровальной иглой. Даже слабые движения плероцеркоидов свидетельствуют о жизнеспособности личинок. Изменение цвета плероцеркоидов, отслоение кутикулы, деструктивные изменения тела указывают на нежизнеспособность личинок.

При проверке эффективности обеззараживания рыбы можно применять метод окрашивания живых плероцеркоидов водным раствором нейтральрота в разведении 1:20000 – 1:50000 в течение 30 –40 мин. Затем рыбу с плеролцеркоидами обеззараживают одним из указанных в Инструкции методом, проверяя через определённое время жизнеспособность личинок. Обесцвечивание личинок, ранее окрашенных нейтральротом в розовый цвет, является одним из показателей их гибели.

Оборудование, необходимое для вскрытия рыбы и определения жизнеспособности плероцеркоидов

Столы лабораторные, табуреты, лампа настольная, шнур-удлинитель, клеёнка, весы, доски разделочные, стекло толстое, кюветы и лотки эмалированные, линейка или лента сантиметровая, микроскоп, бинокулярная лупа, лупа ручная, микрометр, ножи, брусок для заточки ножей, ножницы большие или малые, скальпели, пинцеты анатомические, чашки Петри, стёкла предметные и покровные, стекла для компрессии 9 х 12 и 6 х 9 см, пипетки глазные, воронки, мерная полсуда (мензурки, стаканы), банки большие с притёртыми пробками, пробирки с резиновыми пробками, соль поваренная, формалин, физиологический раствор, желудочный сок, нейтральрот, бумага чёрная, вата, марля, фартуки клеёнчатые, перчатки резиновые, полотенца для рук и посуды, мыло туалетное и хозяйственное, порошок стиральный, тазы, вёдра, дезинфицирующие растворы.

Учёт результатов

При учёте результатов исследований рыбы на заражённость плероцеркоидами лентецов в лабораторном журнале должны быть отражены следующие данныеи показатели: административная территория (область, район, населённый пункт), водоём, какой организацией доставлена рыба для исследований, дата, вид рыбы, длина, масса, возраст, число обнаруженных плероцеркоидов (в полости тела и внутренних органов, кроме яичников; в яичниках; в мускулатуре; всего), вид плероцеркоидов (в необходимых случаях – описание личинок).

Приложение №2

Исследование рыбы на заражённость метацеркариями описторхисов (возбудителем описторхоза) и определение жизнеспособности личинок

Диагностические признаки метацекариев

В организме дополнительного хозяина описторхид – рыб семейства карповых – развиваются личинки гельминта – метацеркарии, которые локализуются в подкожной клетчатке и мышцах рыбы, преимущественно вдоль её средней линии на спинной стороне. Значительно реже метацеркарии паразита обнаруживаются в плавниках, жабрах, глазах, чешуе.

Зрелые метацеркарии описторхид представляют собой цисту овальной формы, внутри которой находятся в согнутом состоянии личинка гельминта. Оболочка цисты двойная: наружная – соединительнотканная, образованная за счёт тканей хозяина, внутренняя – тонкая, образована секретом паразита.

Внутри цисты личинки описторхид подвижны и периодически совершают маятникообразные или «переливающиеся» движения, хорошо заметные при наблюдении под бинокуляром или обычным световым микроскопом в течение 1 – 2 мин.

Личинка гельминта покрыта шипиками, снабжена ротовой и брюшной присосками. В задней части её тела расположен экскреторный пузырь тёмного цвета, хорошо видимый под бинокуляром МБС при увеличении в 16 раз. Циста имеет размеры 0,23 –0,37 х 0,18 - 0,28 мм; длина личинки (без цисты) – 0,44 – 0,63 мм, размеры присосок – 0,07 – 0,08 х 0,06 –0,07 мм.

Перечисленные в инструкции (см. п. 3) виды рыб семейства карповых могут являться дополнительными хозяевами для других видов трематод, не имеющих эпидемиологического значения, метацеркарии которых следует отличать от метацеркариев описторхид (см. «Методические указания по определению возбудителей гельминтозоонозов у пресноводных рыб Беларуси», утверждённую ГУВ Минсельхозпрода РБ 16.10.2007 №10-1-5-/944).

Методы исследования рыбы

Для обнаружения метацеркариев в тканях рыбы используют компрессионный метод или метод переваривания. Более точные результаты будут получены при исследовании всей поверхности мышечной ткани рыбы, которая тщательно отделяется вместе с подкожно-жировой клетчаткой от кожи и плавников.

Компрессионный метод. Для компрессионного исследования с целью экономии времени допустимо исследовать по 5 проб мышц с подкожной клетчаткой с обеих сторон рыбы: по 3 пробы из спинной и 2 из брюшной части мышц с каждой стороны. Каждая проба мышц берётся с площади 1 – 2 см² на глубине 2 – 3 мм.

Мышечную ткань, подлежащую исследованию, измельчают и порциями по 1 – 1,5 г раскладывают либо в компрессории, либо между двумя стёклами размером 6 – 8 х 12 – 15 см. При исследовании вяленой, солёной, копчёной рыбы рекомендуется её предварительно сутки вымачивать в воде.

Готовые компрессионные препараты просматривают под бинокуляром при увеличении в 16 раз. Число найденных метацеркариев подсчитывают. При необходимости метацеркариев выделяют из окружающей ткани с помощью препаровальных игл.

Методы переваривания. Для метода переваривания вся поверхностная мышечная ткань (до 0,5 см) отделяется от кожи, тщательно измельчается ножом или в мясорубке.

Мышечную ткань рыбы заливают в соотношении 1:10 искусственным желудочным соком (11 мл концентрированной соляной кислоты, 7 г пепсина, 9 г поваренной соли на

1 л дистиллированной воды). Пробу помещают в термостат на 3 ч при температуре

36 – 37 ⁰С, после чего содержимое фильтруют в стеклянные цилиндры через металлический фильтр с размером ячеек 1 х 1 мм. Через 15 – 20 мин верхний слой желудочного сока с переваренной мышечной тканью сливают, а осадок переносят в чашку Петри или на часовое стекло, где метацекариев подсчитывают.

Для лучшего отделения личинок в чашку Петри наливают физиологический раствор, делают несколько круговых движений, в результате которых метацеркарии концентрируются в центре чашки Петри, а излишки физраствора с остатками мышечной ткани удаляют пипеткой.

Метод выделения метацеркариев в искусственном желудочном соке применим в полевых условиях. При этом вместо термостата можно использовать стерилизатор для кипячения медицинских инструментов, в который помещают банки с пробками, наливают воду 36 – 37 ⁰С и поддерживают такую температуру в течение 3 ч. Для приготовления искусственного желудочного сока в полевых условиях реактивы разводят дождевой водой. При использовании речной воды её сначала отстаивают, а затем фильтруют.

Эффективность метода переваривания (в сравнении с компрессионным) в 1,5 раза выше. Метацеркарии, выделенные методом переваривания из свежей рыбы, сохраняют свою структуру и жизнеспособность. Кроме рыбы промысловых размеров, в ряде случаев с целью эпидемиологического изучения территории возникает необходимость исследования на поражённость метацеркариями описторхиса мальков (сеголетков) карповых рыб. При этом применяют компрессирование мальков целиком.

Учёт результатов.Поражённость рыбы метацеркариями описторхисов (экстенсивность инвазии) вычисляют по формуле

Р = n · 100 %,

где Р – общая поражённость в процентах; n – число заражённых экземпляров рыб;

N – число исследованных экземпляров рыб.

Интенсивность инвазии (среднее число метацеркариев в 1 экз.) определяют по формуле

J_ср = m

N₁

где J_ср– средняя интенсивность инвазии на одну инвазированную рыбу; m – общее число найденных метацеркариев; N₁ – число инвазированных экземпляров рыб. Количество метацеркариев в весовой единице исследованных проб (J) определяют делением числа всех найденных в пробе личинок (m) на массу пробы (М), т.е. по формуле

J = m.

Для облегчения подсчёта большого количества личинок можно использовать кювету из оргстекла размером 60 х 60 х 15 мм, дно которой разделено на 900 квадратов величиной 2 х 2 мм. Выделенных метацеркариев (с небольшим количеством физиологического раствора) переносят в кювету и равномерно распределяют по поверхности дна. После чего производят их подсчёт, при этом метацеркарии учитываются только в квадратах, расположенных по диагонали, затем производится перерасчёт на общее число клеток кюветы. Ошибка этого способа не превышает 4%.

Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 168; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 123 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!