Опыт 2 Биуретовая реакция белков
Мерным цилиндром налейте в одну пробирку 2 мл раствора яичного белка, в другую - 2 мл 1 %-ного раствора желатина. В обе пробирки добавьте по 2 мл 10 %-ного раствора NaOH и 1 -2 капли 3 %-ного раствора CuSО4. Встряхните содержимое пробирок. Наблюдайте появление характерного окрашивания раствора. О присутствии какой атомной группы в молекулах белка свидетельствует эта реакция?
Реакция обусловлена присутствием в белках пептидных связей, которые образуют окрашенные солеобразные комплексные соединения.
Опыт З Ксантопротеиновая реакция белков
Мерным цилиндром в пробирку налейте 2 мл раствора белка и осторожно добавьте к нему 6-8 капель концентрированной НNО3. Смесь нагрейте в водяной бане до появления светло-желтой окраски. Затем охладите смесь, опустив пробирку в стакан с водой. После охлаждения добавьте 10-12 капель 30 %-ного раствора NaOH. Желтая окраска переходит в оранжевую.
Реакция обусловлена присутствием циклических аминокислот, которые при взаимодействии с азотной кислотой образуют нитропроизводные желтого цвета
Опыт 4 Реакция Фоля на содержащие серу аминокислоты
В четыре пробирки пипеткой налейте по 2 капли раствора Рb(СН3СОО)2 и понемногу прибавляйте концентрированный раствор NaOH до растворения образовавшегося осадка гидроксида свинца. В первую пробирку наливают около 1 мл раствора белка, во вторую -1 мл желатины, в третью - 1 мл гликокола, в четвертую - 1 мл тирозина. Смесь осторожно нагревают. При положительной реакции раствор начинает темнеть.
|
|
Реакция обусловлена наличием в белке содержащих серу аминокислот, которые под действием щелочи разрушаются с образованием сульфида щелочного металла; последний с плюмбитом дает осадок сульфида свинца.
Опыт 5 Реакции на триптофан
Реакции основаны на способности триптофана в кислой среде вступать во взаимодействие с альдегидами, образуя при этом окрашенные продукты конденсации.
А) Реакция Адамкевича
К 5-6 каплям белка добавить 5 капель СН3СООН (концентрированной), слегка подогреть и подслоить (осторожно! по стенке наклоненной пробирки) равный объем H2SO4 (концентрированной). На границе двух слоев жидкости появляется красно-фиолетовое кольцо.
Взаимодействие триптофана с глиоксиловой кислотой (которая всегда присутствует в ледяной уксусной кислоте) приводит к образованию соединения красно-фиолетового цвета.
Б) Реакция Шульца-Распайля
К 5-6 каплям раствора белка приливают 1 каплю 10%-ного раствора сахарозы и подслаивают 1 мл Н2SO4 (концентрированной). На границе раздела жидкостей появляется вишнево-красное окрашивание.
Триптофан, взаимодействуя с оксиметилфурфуролом (образующимся при гидролизе сахарозы и обезвоживании моносахаридов под действием концентрированной серной кислоты) образует комплекс вишнево-красного цвета.
|
|
Опыт 6 Диазореакция на гистиоин и тирозин (реакция Паули)
К свежеприготовленному диазореактиву (3 капли 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты в 2%-ном растворе НС1 и 3 капли 5%-ного раствора NaNO2) добавляют 6-8 капель раствора белка, и, после перемешивания, 3-5 капель 10%-ного раствора Na2CO3. Развивается интенсивная красная окраска.
Реакция обусловлена присутствием а белке аминокислот гистидина и тирозина, которые, реагируя с диазобензолсульфокислой, образуют азокраситель красного цвета.
Лабораторная работа 2
Осаждение белков
Цель: Изучить способы осаждения белков
Оборудование и реактивы: Яичный белок, раствор (3 белка куриных яиц смешивает с 600 мл 3%-ного раствора хлористого натрия); кишечный белок; сернокислый аммоний (насыщенный раствор); сернокислый аммоний кристаллический; азотная кислота концентрированная; трихлоруксусная кислота (5%-ный раствор); фенол . (насыщенный раствор); формальдегид (формалин, 40%- ный раствор);
хлористый натрий кристаллический; сернокислая медь (5%-ный раствор); уксуснокислый свинец (0,5%~ный раствор).
|
|
Ход работы
Опыт 1 Осаждение белка при нагревании
В одну пробирку налейте 2 мл раствора яичного белка, в другую - столько же мышечного. Определите рН в этих растворах. Прокипятите растворы в обеих пробирках. Выпадает ли осадок в пробирках? Объясните происходящие явления.
Опыт 2 Высаливание белков
В пробирку налейте 3 - 4 мл раствора яичного белка, добавьте равный объем насыщенного раствора (NH4)2SO4. Смесь встряхните. Раствор мутнеет от выпадающего осадка белка. Профильтруйте жидкость через фильтр. Фильтрат в количестве 2 мл отлейте в пробирку и прокипятите. Наблюдайте свертывание оставшихся в фильтрате белков. Какие это белки?
К оставшемуся непрокипяченному фильтрату добавьте избыток кристаллического (NH4)2SO4 до прекращения его растворения. Наблюдайте появление мути или хлопьев осажденного белка. Объясните механизм высаливания белков.
Опыт 3 Осаждение белка органическими растворителями
К 1 мл раствора яичного белка прилейте 2 - 3 мл С2Н5OН или ацетона. Раствор мутнеет. Добавьте 1 каплю раствора NaCl и дайте постоять. Что наблюдается?
Опыт 4 Осаждение белка концентрированными минеральными кислотами
|
|
В пробирку налейте 1 мл концентрированной НNО3 и, наклонив её под углом 45°, осторожно по стенке пробирки опустите из пипетки равный объем раствора белка. Что наблюдается на границе двух слоев? Вместо НNО3 можно ваять концентрированную H2SO4 или НС1.
Опыт 5 Осаждение белка солями тяжелых металлов
Налейте в 2 пробирки по 1мл раствора яичного белка. По каплям добавляйте в одну пробирку 5 %-ный раствор CuSO4, в другую -0,5%-ный раствор Рb(СН3СОО)2. Появляется осадок. Объясните почему?
Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 794; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!