Способы культивирования анаэробов
возбудитель анаэробный инфекция
- Механический;
- Химический;
- Биологический.
Механический способ
а) Удаление воздуха механическим путем. Удаление воздуха (а, следовательно, и кислорода) проводят в специальных приборах - анаэростатах путем выкачивания. Этот прибор может быть заменен эксикатором.
б) Механическая защита от кислорода воздуха. Делают посев по методу Вейон-Виньяля в пастеровских пипетках. Для посева в чашках делают посев по методу Перетца, для этого разведения исследуемого материала в расплавленном агаре выливают в чашки Петри, на дно которых положены на стеклянные палочки или спички стерильные стеклянные пластинки. Между дном чашки и стеклянной пластинкой образуется капиллярная полость, куда расплавленный агар быстро затекает. Высота слоя агара под стеклом 1-2 мм, в этом слое вырастают анаэробы, в то время как над стеклом растут аэробы.
в) Замена воздуха индифферентным газом. В этом случае в анаэростат после откачивания воздуха нагнетают азот или, присоединив анаэростат к аппарату Киппа, вытесняют воздух с кислородом образующимся водородом.
г) Наиболее простой способ - посев уколом в высокий столбик сахарного агара.
Химический способ
Основан на способности некоторых веществ (щелочной раствор пирогаллола, гидросульфит натрия), поглощать кислород из воздуха. Засеянные чашки, или пробирки помещаю в специальные аппараты: Аристовского, 0мелянского или микроанаэростат, эксикатор, туда же помещают поглощающие вещества в чашке Петри, аппарат плотно закрывают.
|
|
|
Биологический способ
Основан на совместном выращивании в чашке анаэробов и аэробов-метод Фортнера. После посева чашки закрывают, заливают парафином для герметичности. Выросшие аэробы используют кислород и создают бескислородные условия для роста анаэробов.
В некоторых случаях, когда не требуется низкого парциального давления кислорода, кислород из воздуха можно удалить, поместив в эксикатор горящую свечу.
5.
Среды и аппаратура для культивирования анаэробов
Среда Китта-Тароцци – представляет собой питательный бульон с 0,5% глюкозы, в который погружены кусочки печени или мяса. Перед посевом среду кипятят 20 мин, быстро остужают до 45° С и засевают сразу же, после посева в пробирку на поверхность среды наливают стерильное вазелиновое масло, чтобы защитить посев от кислорода.
Анаэростат – прибор, служащий для создания и поддержания стабильно анаэробных условии. Промышленность изготовляет микроанаэростаты и макроанаэростаты.
Микроанаэростат – представляет собой толстостенный металлический стакан цилиндрической формы, который через вакуумную резиновую прокладку закрывают металлической крышкой. Но крышке расположены вакуумметр и патрубок для откачивания и нагнетания воздуха и газа. Крышку прижимают к краям стакана винтом с дугообразным хомутом.
|
|
|
Макроанаэростат – это водяной термостат, внутри которого вмонтирован анаэростат – толстостенный металлический котел цилиндрической формы, герметически закрывающийся крышкой со стеклом для наблюдения за ростом микробов. На верхней стенке анаэростата находятся вакуумметр и патрубок для откачивания воздуха. Рабочая камера имеет съемные полочки для чашек и пробирок. В макроанаэростате вакуум должен быть доведен до 3-10 мм ртутного столба.
Эксикатор – стеклянный толстостенный сосуд, закрывающийся крышкой, которую можно притереть к краям эксикатора. В крышке имеется патрубок с краном для откачивания или нагнетания воздуха.
Посев по Фортнеру
Кровяной питательный агар разливают в чашки Петри толстым слоем, после застывания по диаметру агар вырезают в виде узкой щели. На одну половину чашки засевают культуру аэробного микроба, жадно поглощающего кислород (кишечную палочку, чудесную палочку), а на другую половину засевают исследуемый материал. Чашку закрывают, заливают парафином. Аэробные бактерии быстро используют кислород воздуха в герметически закрытой чашке, затем начинают размножаться анаэробы, через 24-48 часов чашку открывают и из отдельных колоний анаэробов выделяют чистую культуру.
|
|
|
Посев по Вейон-Виньялю
В пастеровских пипетках. Пастеровские пипетки представляют собой длинные трубки (20-25 см) диаметром около 5 мм, приготовленные из легкоплавкого стекла. Один конец пипетки открыт, а другой вытянут в виде капилляра и запаян. Перед стерилизацией в широкий конец вставляют вату. Исследуемый материал разводят полужидким агаром с небольшим содержание глюкозы, затем из каждого разведения насасывают агар в стерильную пастеровскую пипетку, предварительно обломив запаянный конец капилляра, и избегая попадания пузырьков воздуха. Затем капилляр запаивают и пипетки помещают в термостат. Через 24-48 часов в среде можно обнаружить ясно видимые колонии бактерий в виде пушинок, комочков ваты, зерен чечевицы и т.д. Нужные колонии можно извлечь, распилив трубку.
Выделение чистых культур анаэробных бактерий:
1 этап. Накопление материала.
Исследуемый материал, предварительно прогретый в течение 15 мин при 80°С для уничтожения вегетативной флоры (споры анаэробов при этом не гибнут), засевают на среду Кита-Тароцци и ставят в термостат.
|
|
|
2 этап. Выделение чистой культуры.
После суточного инкубирования в результате роста микробов среда мутнеет, иногда в ней видны пузырьки газа. Выделение культуры проводят или по методу Цейсслера или по методу Вейнберга.
Метод Цейсслера
Каплю материала со среды Китта-Троцц помещают в чашку с кровяным сахарным агаром, тщательно распределяют его по поверхности среды шпателем, затем этим же шпателем делают посев во второй и третьей чашке. Сутки инкубируют чашки в термостате в анаэробных условиях. На следующий день по форме колоний и морфологии микробов, изученной в мазках, окрашенных по Граму, ориентировочно определяют вид бактерий, изученные колонии пересевают на среду Кита-Тароцци для выделения чистой культуры и точного определения виды микроорганизмов.
Метод Вейнберга
1-2 капли материала со среды Кита-Тароцци вносят в пробирку с МПБ для разведения. Затем пастеровской пипеткой с запаянным концом переносят материал последовательно в 3-5 узких пробирок с сахарным МПА, предварительно расплавленным и прокипяченным в течение 20 мин и остуженным до 50°С, погружая капилляр пипетки в расплавленный агар до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают под струей холодной воды, при этом агар застынет и зафиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток. Инкубируют в анаэробных условиях. Через сутки отбирают колонии, на уровне колонии пробирку распиливают, колонию отсасывают пипеткой и переносят в среду Китта-Троцци для накопления и идентификации.
6.
Заключение
В данной курсовой работе по теме: возбудители анаэробных инфекций, цель которой изучить возбудителей анаэробных инфекций, полностью раскрыта, были расписаны возбудители клостридиальных и не клостридиальных инфекций.
В ходе моей работе были выполнены все задачи поставленные в данной курсовой, были расписаны возбудители клостридиальных и не клостридиальных инфекций, был предоставлен материал по средам и методам, условиям культивирования анаэробных инфекций. Были даны, для ознакомления слушателей, основные понятия, применяемые в данной курсовой.
В Российской Федерации каждый год регистрируются много случаев заболевания анаэробных инфекций. Статистика для них неутешительна: заболеванием возбудителя ботулизма в год около 300 человек, причем около у 30 человек инфекционный процесс заканчивается летальным исходом.
Заболевание столбняком в России приходится на 15 – 17 случаев в год. Половина из этих случаев заканчивается летальным исходом.
Статистика заболевания гангреной, тоже неутешительна, в России в год приходится около 1000 человек , 200-300 из этих случаев заканчивается летальным исходом.
Размещено на Allbest.ru
Дата добавления: 2019-11-25; просмотров: 685; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!