Методы генетического анализа микробиологии.
Генетический анализ позволяет составить подробные карты генетической организации хромосом. Генетический анализ состоит в экспериментальном изучении отношений, существующих между бактериями (мутантами). Для определения этих отношений используют два основных приема:1) рекомбинационный - определяет пространственное расположение генов (или мутаций) на генетической карте, т.е. картирование генома; 2) комплементационный - определяет функциональные отношения генов. Бактерии, способные к быстрому размножению, дают возможность затрачивать на эксперимент сравнительно небольшое время. Кроме того, методы отбора мутантов или рекомбинантов просты и доступны. Основной прием отбора - применение набора минимальных сред в сочетании с посевом штампом-репликатором. Такой метод позволяет установить характер мутации (или рекомбинации) и расположение соответствующего гена на генетической карте. Наиболее часто применяются следующие методы картирования:
С помощью прерванной конъюгации (с посевом микробов на минимальные среды через определенные интервалы времени в процессе конъюгации);2) с помощью трансдукции (т.е. с помощью фага);3) с помощью трансформации (после искусственного разрушения бактерий-доноров изучают характер изменений бактерий-реципиентов).Генетический анализ может проводиться и с помощью ДНК-(РНК)-зондов в реакции гибридизации. Этот метод важен не только с теоретической точки зрения, но и с практической - как наиболее специфичный метод идентификации микробов и вирусов. Реакция гибридизации состоит из следующих этапов:1) разрушение исследуемых микробов, денатурация и рестрикция ДНК (нужны одноцепочечные участки) и фиксация на полимерной пленке;2) внесение ДНК-зонда. Если зонд комплементарен с ДНК исследуемых микробов, то произойдет связывание, т.е. гибридизация, несвязавшиеся зонды удаляют промыванием; 3) учет результатов - с помощью авторадиографии.
|
|
|
Другой важной реакцией, основанной на методах генной инженерии является цепная полимеразная реакция (ЦПР), применяемая в медицинской микробиологии, вирусологии, иммунологии. Сущность метода заключается в получении из материала от больного не микроорганизма, а одноцепочечных фрагментов генома (ДНК), его биосинтезе с последующей идентификацией видоспецифических фрагментов молекулярно-генетическими методами.
Колонии-видимые невооруженным глазом скопления клеток или мицелия, образуемые в процессе роста и размножения микроорганизмов на (или в) плотном питательном субстрате. Различаются у разных организмов по величине, характеру поверхности, консистенции, окраске, что, в свою очередь, зависит от размеров клеток, наличия жгутиков, спор, капсулы. В естественных условиях К. возникают на поверхности пищевых продуктов, на почве, гниющих остатках растений и т. п. В лаб. условиях К. получают при посеве микроорганизмов на агаризованные и др. твердые питательные среды.Характеристика К. учитывается при определении вида микроорганиз.
|
|
|
Билет
1)Дисбиоз —клинико-микробиологический синдром, характеризующийся:
Нарушением качественного и количественного состава микроорганизмиоценоза определенного биотопа, выходящим за пределы физиологической нормы либо транслокацией представителей нормофлоры в другие биотопы; увеличением количества атипичных штаммов: множественно-устойчивых, гемолитических, капсулированных, токсигенных, со сниженной ферментативной активностью. Эти микроорганизмы, как правило, резистентны к антибиотикам и при подавлении нормальной микрофлоры и снижении естественной резистентности получают возможность беспрепятственно размножаться.При дисбактериозепроисходят стойкие количественные и качественные изменения бактерий, входящих в состав нормальной микрофлоры. Придисбиозеизменения происходят и среди других групп микроорганизмов (вирусов, грибов, простейших, гельминтов).
|
|
|
Причины дисбиоза:-длительное и нерациональное, часто бесконтрольное применение антимикроорганизмных препаратов широкого спектра действия;-физическое и умственное перенапряжение, дисстресс,-лучевая терапия, химиотерапия, иммуносупрессивная терапия;-нерациональное питание;-нарушение сна;-оперативные вмешательства;-трансплантации органов;-неблагоприятно действие экологических факторов (переохлаждение, перегревание, влияние ионизирующей радиации);-первичные и вторичные иммунодефициты (СПИД);-другие инфекции;-органические заболевания ,-врожденные и приобретенные иммунодефициты;-нарушение барьерной функции кожи и слизистых;-профессиональные вредности;-длительное пребывание в замкнутом коллективе
Классификации дисбиозов:по этиологии(грибковый, стафилококковый, энтеробактериальный, псевдомонадный, вызванный ассоциацией микрорганизмов);по локализации(дисбиоз кожи, рта, носоглотки, кишечника, влагалища).
Дисбиоз полости рта может проявляться дисбиотическим сдвигом или иметь 4 степени проявления. Дисбиотическийсдвиг-сохранение нормального видового состава микрофлоры незначительное превышение одного вида УПМ иклинические проявления отсутствуют.1-2-нормальное содержание или некоторое уменьшение нормальной микрофлоры (негемолитических и ?-гемолитических стрептококков, лактобактерий)2–3 патогенных вида бактерий.3 резкое уменьшение или полное отсутствие нормальной микрофлоры патогенная микрофлора в значительном количестве ?104 КОЕ/мл .4 наличие ассоциаций патогенных видов бактерий с дрожжеподобными грибами рода Candidaв количестве?103 КОЕ/мл.
|
|
|
Микоплазмы - это очень мелкие бактерии, не имеющие клеточной стенки. Вместо ригидной клеточной стенки они покрыты трехслойной “объединяющей” мембраной, микоплазмы резистентны к антибиотикам – ингибиторам синтеза клеточной стенки.
В отличие от других форм микроорганизмов с дефектной клеточной стенкой они не могут давать варианты с полноценной клеточной стенкой. Микоплазмы окрашиваются грамотрицательно, неподвижны. Аэробы и анаэробы. Спор и капсул не имеют. В патологии человека наибольшую роль играют M.pneumoniae, M.hominis, M.fermentas, M.genitalium.Патогенные для человека микоплазмы вызывают у него заболевания (микоплазмозы) дыхательных, мочеполовых путей и суставов с разнообразными клиническими проявлениями.Источником инфекции является больной человек, а также носители. Заражение происходит воздушно-капельным путем. Возбудитель адсорбируется на слизистой оболочке верхних дыхательных путей, размножается и активно распространяется по слизистой оболочке.
Хламидии - возбудители хламидиозов, относятся к семейству Chlamydiaceae, роду Chlamydia.прокариоты, отличительной биологической особенностью которых является облигатный внутриклеточный паразитизм. Они неспособны синтезировать АТФ, поэтому являются энергетическими паразитами клетки- хозяина.Хламидии размножаются в цитоплазме клеток-хозяина, проходя определенные стадии развития. Этот уникальный цикл развития хламидий продолжается 40-72 часа и включает две различные по морфологическим и биологическим свойствам формы существования: 1)элементарное тельце - внеклеточная собственно инфекционная форма хламидий, представляющая из себя сферические образования; 2)инициальное (ретикулярное) тельце - форма внутриклеточного существования хламидий в виде цитоплазматических включений и обеспечивающая их репродукцию.Для диагностики хламидийной инфекции широко используются методы серодиагностики, иммуноиндикации (реакция иммунофлюоресценции), молекулярно-генетические методы (ПЦР), но “золотым стандартом” остается выделение хламидий при заражении культуры тканей.
Механизмы противовирусного иммунитета имеют особенности, определяемые природой вирусов, паразитизмом на уровне молекулярных и субмолекулярных структур. Внеклеточный вирус не проявляет своего патогенного действия, а иммунные реакции против внеклеточных вирионов сходны с реакциями на другие микроорганизмы. Защитные реакции, направленные на внутриклеточные стадии развития вируса, действуют не на вирус, а на инфицированную вирусом клетку. Только таким путем происходит подавление репродукции вируса и освобождение от него.Факторы врожденной (естественной, видовой) резистентностиневосприимчивого организма обусловливают врожденное состояние невосприимчивости к данной вирусной инфекции. Видовая резистентностьопределяется не иммунологическими реакциями организма, а неспецифическими механизмами. Имеют значение анатомические барьеры. Главную роль играет клеточная резистентость, обусловленная неспособностью вируса адсорбироваться и проникнуть в клетку.Это обеспечивает абсолютную видовую невосприимчивость. Факторы неспецифической резистентности восприимчивого организмаспособны на первых этапах взаимодействия вируса с организмом подавить дальнейшее размножение и генерализацию вируса задолго до включения механизмов иммунитета. Фагоцитоз, играющий очень важную роль в противобактериальной защите, малоэффективен против вируса. Различна роль микрофагов и макрофагов. Полиморфнонуклеарные лейкоциты лейкоциты не играют существенной роли в защите. С другой стороны, макрофаги фагоцитируют вирусы и пораженные вирусами клетки и играют важную роль в освобождении кровотока от вирусов. Температурный фактор, повышение температуры тела при вирусной инфекции имеет существенное значение в защите, так как не только активирует многие защитные механизмы, но и обеспечивает термоинактивацию вирусов.Играет также роль регенерация клеток, в результате которой идет селекция резистентных к вирусу клеток.Интерфероны - семейство кодируемых хозяином белков, продуцируемых клетками при стимуляции вирусными или невирусными индукторами. Интерферон сам по себе не обладает прямым действием на вирусы, но он воздействует на другие клетки того же вида, обеспечивая им невосприимчивость к вирусной инфекции.
4)Благодаря толщине свое оболочки и плотности содержимого, споры остаются неокрашенными при обработке препарата анилиновыми красителями простым методом или сложным по Граму. Существует несколько методов окраски спор (по Циль – Нильсену, по Ганзену, по Ожешко и др.) позволяющих достигнуть контрастной окраски спор в цитоплазме. Методика окраски микропрепарата:
На фиксированный препарат накладывается полоска фильтровальной бумаги (для защиты препарата от оседающих кристаллов красителя) и на нее наливается карболовый фуксин Циля. Препарат осторожно прогревается в течение 3 – 4 минут над пламенем горелки. По мере испарения жидкости краситель добавляется.
2) Фильтровальная бумага снимается и на мазок наносится 2 – 3 капли 5% раствора кислоты (серной, соляной, азотной или уксусной) на 30 секунд.
Дата добавления: 2018-08-06; просмотров: 441; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!