Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию
Ориентировочная основа деятельности студентов для проведения лабораторной работы:
Работа №1. Определение общего холестерина крови ферментативным методом
Принцип метода. Определение холестерина основано на использовании сопряженных ферментативных реакций, катализируемых холестеролэстеразой, осуществляющей гидролиз эфиров холестерина до свободного холестерина; холестеролоксидазой, осуществляющей превращение холестерина в холестенон с образованием Н2О2; пероксидазой, осуществляющей окисление перекисью 4-аминоантипирина и фенола с образованием окрашенного продукта розово-малинового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации холестерина.
Реактивы:
А) Рабочий реагент - смесь лиофильно высушенных ферментов, буферного раствора, фенола, аминоантипирина
Б) Калибратор – калибровочный раствор холестерина 4,65 ммоль/л
Порядок выполнения работы:
1. 1 мл рабочего реагента наливают в пробирку №1 (опыт) и пробирку №2 (калибровочная проба), затем прогревают 5 минут при 370 С
2. В пробирку №1 (опыт) добавляют 0,01 мл сыворотки крови, в пробирку №2 (калибровочная проба) - 0,01 мл калибратора
3. Пробирки выдерживают 20 минут в термостате при 370 С
4. Измеряют оптическую плотность растворов на ФЭКе против Н2О при длине волны 490 нм в кювете 0,3 см
5. Расчет проводят по формуле: х = (Аопыт : Акалибр.) × 4,65 ммоль/л,
Где А – оптическая плотность растворов (показания ФЭКа)
|
|
|
Уровень холестерина в норме (сыворотка) – 3,63 - 8,03 ммоль/л
рекомендуемые пределы (желательные) для взрослых - < 5 ммоль/л
Клинико-диагностическое значение. Гиперхолестеринемия – увеличение холестерина в крови, сопровождает гиперлипопротеинемии IIA, IIB, III типов; заболевания печени, холестаз, нефротический синдром, злокачественные опухоли поджелудочной железы и простаты, сахарный диабет и другие заболевания. Гиперхолестеринемия является фактором риска развития атеросклероза и одним их биохимических тестов патологии. Гипохолестеринемия наблюдается при болезнях печени (цирроз в поздней стадии заболевания, острая дистрофия печени), голодании, сепсисе, гиперфункции щитовидной железы и др.
Работа №2. Количественное определение ЛПНП в сыворотке крови
Принцип метода: метод основан на способности ЛПНП осаждаться в присутствии хлорида кальция и гепарина; при этом изменяется мутность раствора (гепарин способен образовывать с ЛПНП комплекс, который в присутствии хлорида кальция выпадает в осадок). По степени помутнения раствора и судят о концентрации ЛПНП в сыворотке крови.
Порядок выполнения работ:
- В пробирку вносят 2 мл 0,27% раствора Cacl2 и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают.
- Определяют оптическую плотность раствора (А1) против Н2О при длине волны 630 нм в кювете 0,5 см.
- Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют 0,04 мл (2 капли) 1% раствора гепарина, перемешивают.
- Ровно через 4 минуты снова определяют оптическую плотность раствора (А2) в тех же условиях.
- Расчет проводят по формуле: х = (А2 – А1)×100
В норме содержание ЛПН в сыворотке крови составляет 3 – 4,5 г/л .
|
|
|
Клинико-диагностическое значение. Дислипопротеинемия – нарушение физиологического соотношения классов липопротеинов с повышением содержания определенного класса. Гиперлипопротеинемия – повышение концентрации в крови определенных классов липопротеинов, чаще всего - атерогенных (ЛПНП, ЛПОНП). Увеличение концентрации ЛПНП наблюдается при атеросклерозе, холестазе, острых гепатитах, диабете, ожирении и др.
Учебно-материальное обеспечение
1. Кровь (имитация)
2. Химическая посуда, дозаторы, реактивы
3. ФЭК
4. Термостат
Наглядные пособия:
1. Таблицы
2. Технические средства обучения: (компьютер, видеопроектор)
Литература:
а) обязательная
1. Биологическая химия: Учебник/Е.С, Северин, Т.Л. Алейникова и др.- М.: ООО
|
|
|
« Медицинское информационное агентство», 2008. - 368 с.
2. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. - М.: «ГЭОТАР-МЕД», 2003 – 784 с.
3. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева, 3 изд. - М.: «ГЭОТАР», 2005 – 441 с.
4. Биохимия с упражнениями и задачами: Учебник/Под ред. Е.С.Северина.- М.: «ГЭОТАР», 2008 – 384 с.
5. Биохимия с упражнениями и задачами: Учебник/Под ред. Е.С.Северина.- М.: «ГЭОТАР», 2011 – 624 с.
6. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.:«Медицинское информационное агентство». – 2004. -566 с.
7. Щербак И.Г. Биологическая химия: Учебник. – СПб.: «Издательство СПбГМУ», 2005. – 480 с.
б) дополнительная
1. Хасина М.А. Словарь-справочник по клинической биохимии – Владивосток: «Медицина ДВ», 2008.
2. Интернет-ресурсы(http://www.biblioclub.ru/. http://www.studmedlib.ru/ и др.).
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Тихоокеанский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
Кафедра Общей и биологической химии
| УТВЕРЖДЕНО на заседании кафедры протокол № 14 от «27 » июня 2016 г. Заведующий кафедрой доц. Н.С. Иванова |
Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 370; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!