Определение общего количества микроорганизмов в воде
Общее микробное число воды определяют путем культивирования содержащихся в пробах бактерий в плотных питательных средах. Из каждой пробы отобранной воды должен быть сделан посев не менее двух объемов по 1 мл. В зависимости от предполагаемой загрязненности водоема перед посевом готовят десятикратные разведения исходной пробы в стерильной водопроводной воде.
Рекомендуемые для посева разведения воды в зависимости от степени ее загрязненности при определении общего микробного числа (объем каждого разведения для посева составляет 1 мл)
| Тип исследуемой воды | Рекомендуемые для посева разведения воды |
| Водопроводная вода и вода артезианских колодцев | 1мл исходной воды без разведения |
| Чистая вода (вода колодцев, родников и др., вода плавательных бассейнов) | 1 и 1:10 |
| Открытые водоемы, не загрязненные сточными водами | 1; 1:10 и 1:100 |
| Чистые водоемы в местах массового купания | 1:10 и 1:100 |
| Открытые водоемы, загрязненные сточными водами | 1:10; 1:100 и 1:1000 |
| Сильно загрязненные хозяйственно-бытовые воды и сточные жидкости | 1:10000; 1:10 0000 и 1:100 000 |
Для получения разведений берут ряд пробирок, содержащих по 9мл стерильной водопроводной воды. Исследуемую воду в объеме 1мл вносят в первую пробирку, получают разведение 1:10, затем из этой пробирки переносят 1мл в следующую и т.д. (рис.1). Для приготовления каждого разведения используют новую стерильную пипетку. Из полученных разведений вносят по 1мл воды в 2 чашки Петри для подсчета средних показателей и заливают 15-20мл расплавленного и охлажденного до 45ºС МПА. Содержимое чашек тщательно перемешивают круговыми движениями, перемещая их по поверхности стола. После застывания агара, чашки помещают в термостат на 24 ч при температуре 37ºС. Колонии бактерий растут, как на поверхности питательной среды (аэробы), так и в ее глубине (анаэробы). Должны быть подсчитаны все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Подсчет следует производить только на тех чашках, на которых выросло не более 300 изолированных колоний.
|
|
|
Подсчитанное количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на два. Результат выражают числом колоний образующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды.
Если воду предварительно разводили, то полученную сумму умножают на степень разведения и в итоге получают количество микроорганизмов в 1мл исходной воды.
Общее микробное число в 1мл питьевой воды не должно превышать 50.
Индикаторы фекального загрязнения: общие колиформные бактерии (ОКФБ), термотолерантные колиформные бактерии (ТТКФБ), сульфитредуцирующие клостридии, бактериофаги, термофилы.
|
|
|
Определение бактерий группы кишечной палочки (БКГБ)
Санитарно-показательными микроорганизмами в воде являются бактерии группы кишечной палочки (БГКП). Они также называются колиформными (от лат. Escherihia coli - кишечная палочка.) Эта группа объединяет факультативно анаэробных представителей семейства Enterobacteriaceae.
ОКФБ - это санитарно-бактериологическое и экологическое понятие. Указывают на средней давности фекальное загрязнение. Включает представителей семейства Enterobacteriaceae, родов: Escherichia, Citerobacter, Enterobacter, Serracia, Klebsiella, Proteus и др.
ОКФБ: Грам«-» короткие палочки, спор не образуют, способны расти на дифференциально-диагностических средах, сбраживающие глюкозу и лактозу с образованием кислоты и газа при 37 С в течение 24-48 часов, не обладают оксидазной активностью
ТТКФБ (термотолерантные колиформные бактерии). Свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении. Обладают всеми признаками ОКФБ, но способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при 44С в течение 24 ч.
Бактерии группы кишечной палочки выявляются различными методами. Наиболее распространенным является метод мембранных фильтров.
Определение БГКП методом мембранных фильтров
Для определения БГКП этим методом используют фильтровальный аппарат Зейтца, (рис. 4), который перед началом исследований протирают тампоном, смоченным в спирте, стерилизуют прокаливанием и устанавливают на колбе Бунзена.
|
|
|
Затем в прибор помещают нитрацеллюлозный или ацетатцеллюлозный мембранный фильтр с диаметром пор не более 0,45 мкм. Такие фильтры предварительно стерилизуют методом кипячения. Выбранный для исследования объем воды пропускают через фильтр, присоединяя аппарат к вакуумному насосу. Если анализируют несколько проб воды, то для каждой из них используют отдельный мембранный фильтр. Перед фильтрованием новой пробы аппарат стерилизуют. После пропускания через них воды фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри, располагая их на питательной среде фильтрующей стороной вверх. Чашки затем инкубируют в термостате 24 ч при 37ºС. В состав среды Эндо входят лактоза, индикатор и МПА и поэтому БГКП образуют на ней колонии красного цвета с металлическим отливом. Подсчитывают количество таких колоний, готовят из них мазки и окрашивают по Граму, а также проверяют оксидазную активность. Оксидазоотрицательные бактерии, разлагающие лактозу до кислоты и газа, обнаруженные на фильтре, позволяют дать положительный ответ о наличие в воде БГКП. При анализе питьевой воды вычисляют количество БГКП, содержащихся в 100 мл.
|
|
|
Для дифференциации ОКБ (общих колиформных бактерий) и ТКБ (термотолерантных колиформных бактерий) каждую выросшую на фильтре колонию БГКП засевают в две пробирки с лактозной средой. Одну из пробирок предварительно прогревают до 44ºС с тем, чтобы инактивировать ОКБ. Затем эту пробирку инкубируют при этой же температуре в течение 24 ч (для подтверждения наличия ТКБ). Вторую пробирку с посевом ставят в термостат при температуре 37ºС на 48 ч, чтобы убедиться в наличии ОКБ.
Загрязненную воду открытых водоемов предварительно разводят и для фильтрации используют объем не менее 10 мл. Дальнейшие исследования проводят, как описано выше.
Колба Бунзена
Рис. 4. Фильтр Зейтца и колба Бунзена для фильтрации воды
Определение БГКП бродильным (титрационным) методом
Этот метод известен также под названием: «двухфазный бродильный метод». Для установления содержания колиформных бактерий в воде, исследуемые пробы засевают в глюкозо-пептонную среду (ГПС) для подращивания микроорганизмов. Объемы воды при этом определяются в зависимости от водоисточника и предполагаемой степени его загрязненности.
1 этап исследования. (1 фаза) Исходный объем воды делят на несколько порций, которые засевают в различные объемы питательной среды. Например, посев воды с исходным объемом 300 мл производят следующим образом: два объема по 100 мл засевают в два флакона с 10 мл питательной среды, а 10 объемов по 10 мл той же пробы воды засевают в 10 пробирок, содержащих по 1 мл питательной среды. Посевы инкубируют в термостате при 43ºС в течение 7 -12 ч. Указанная температура подавляет рост сапрофитных микроорганизмов, но не влияет на колиформные бактерии.
На 2 этапе (2 фаза) из флаконов и пробирок, при наличии в них признаков роста (помутнение, газообразование) делают высевы петлей на чашки Петри со средой Эндо, разделенной на 3-4 сектора, и помещают их в термостат при 37ºС на 18-20ч для того, чтобы получить рост изолированных колоний. Емкости с посевами воды в среде ГПС, на которых через 7-12 ч не было признаков роста, оставляют в термостате еще на 24 - 48 ч. Отсутствие роста в них через 48 ч свидетельствует об отсутствии в воде БГКП. При просмотре посевов на среде Эндо обращают внимание на колонии красного, розового, бледно-розового цвета с металлическим блеском. Делают из них мазки, окрашивают по Граму и проверяют оксидазную активность, позволяющую дифференцировать ОКБ от других грамотрицательных бактерий. Наличие грамотрицательных, оксидазоотрицательных палочек свидетельствует о наличие в воде БГКП. Для определения термотолерантных колиформных бактерий по 2-3 лактозоположительные колонии из каждого сектора со среды Эндо засевают в пробирки с любой средой, содержащей лактозу, предварительно нагретой до 44ºС и помещают в термостат на 24 ч при той же температуре. Образование в пробирках кислоты и газа свидетельствует о том, что в исследуемой пробе присутствуют термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ). Это позволяет сделать вывод о свежем фекальном загрязнении воды.
Сульфитредуцирующие клостридии – это спорообразующие анаэробные палочки, восстанавливающие сульфит натрия при культивировании на железосульфитном агаре при 44°С в течение 18 часов. Обнаружение спор в почве, воде открытых водоемах свидетельствует о давнем фекальном загрязнении. Обнаружение спор на оборудовании пищеперерабатывающих предприятий или в питьевой воде – недостаточности дезинфекции
Бактериофаги являются показателями вирусологического фекального загрязнения (энтеровирусами) и косвенно свидетельствуют о присутствии бактерий, к которым они тропны.
Термофилы - показатели загрязнения компостом и навозом. Это спорообразующие Грам«+» бациллы, актиномицеты, активно размножающиеся в компостных кучах, навозе при температуре 55-60°С
Характеристика загрязнений объектов внешней среды по СПМО. О массивности свежего фекального загрязнения судят по количеству ОКФБ и ТТКФБ. О давности фекального загрязнения судят по соотношению ОКФБ и сульфитредуцирующих клостридий. О характере загрязнения судят по соотношению фекальных бактерий и термофилов
Дата добавления: 2021-12-10; просмотров: 25; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!