Подготовка проб к исследованию (первичная обработка проб)
Прием и сортировку проб проводят в специально отведенном для этого помещении или настольном боксе лаборатории.
Сортировка проб состоит из:
- определения очередности исследования проб;
- определения возможности объединения (усреднения) проб;
- увлажнения (при необходимости) сухих материалов пробы небольшим количеством стерильного изотонического раствора хлорида натрия;
- отделения от пробы части материала, подлежащего (в случае необходимости) пересылке в лаборатории, проводящие индикацию в полном объеме.
В первую очередь исследованию подлежат:
- пробы воздуха;
- осколки и содержимое биологических боеприпасов;
- смывы из носоглотки людей, оказавшихся без защиты в зоне прохождения аэрозольного облака;
- материалы от внезапно заболевших людей.
Объединение этих проб не допускается. Остальные пробы, если их раздельное исследование лаборатория обеспечить не может, могут быть объединены (но не более 3—5 образцов в одну пробу). В этих случаях объединению подлежат только односменные пробы, взятые в одном очаге.
Каждую поступившую пробу регистрируют в специальном журнале, куда вносят основные данные сопроводительной записки и время доставки ее в лабораторию.
Первичная обработка пробы состоит из:
- приготовления мазков для МФА из нативных материалов пробы;
- перевода сухих и плотных материалов пробы в жидкую фазу;
- концентрирования содержащихся в пробе возбудителей физическими (иммуносорбционными) методами.
|
|
В целях четкой организации и преемственности исследований все подлежащие анализу материалы (мазки, взвеси и т. п.) целесообразно маркировать, помимо номера пробы, римскими цифрами, обозначающими ту или иную стадию анализа:
- цифрой «I» обозначают мазки-отпечатки, приготовленные из нативных материалов пробы для ее первичной обработки;
- цифрой «II» обозначают мазки-отпечатки, приготовленные из нативной жидкой пробы или из взвеси, полученной после перевода пробы в жидкую фазу, а также сами нативные взвеси пробы;
- цифрой «III» обозначают мазки и взвеси, приготовленные из материалов, пробы после ее концентрирования физическими (или иммуносорбционными) способами;
- цифрой «IV» обозначают мазки и взвеси, приготовленные из посевов на питательные среды, пластин с монослоем зараженной клеточной культуры и поддерживающую культуральную жидкость из пробирок с культурой клеток;
- цифрой «V» обозначают мазки-отпечатки и взвеси, приготовленные из органов лабораторных животных, использованных для биологического обогащения пробы,
Из нативных материалов пробы мазки готовят на трех предметных стеклах (по 8-10 мазков на каждое стекле). После фиксации в течение 15-20 мин в охлажденном ацетоне два стекла с мазками используют для исследования, одно (резервное) хранят на холоде до конца анализа данной пробы.
|
|
Из жидких материалов пробы мазки готовят в виде маленьких капель, наносимых на стекло в центре каждого квадрата бактериологической петлей, диаметром 2-3 мм.
Из плотных материалов пробы мазки готовят в виде препаратов-отпечатков на предметном стекле.
Из секционного материала и органов животных мазки готовят в виде отпечатков на предметном стекле. Для этого от исследуемого органа отрезают кусочек и поверхностью среза слегка прикасаются к предметному стеклу. Если ткань органа чрезмерно пропитана кровью, избыток ее целесообразно удалить, вначале прикоснувшись срезом к листу фильтровальной бумаги.
Перевод пробы в жидкую фазу предусматривает суспензирование плотных (сухих) материалов в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия. Вначале готовят взвесь исследуемого материала в небольшом объеме изотонического раствора хлорида натрия - до 5 мл (получение так называемого первичного объема жидкой фазы). После того как из этой суспензии будут приготовлены мазки на предметных стеклах, ее объем доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 22 мл (получение так называемого конечного объема жидкой фазы пробы).
|
|
При поступлении пробы в виде секционного материала или органов животных жидкую фазу получают путем гомогенизации кусочков исследуемого материала в стерильной фарфоровой ступке. Стерильный изотонический раствор хлорида натрия добавляют к гомогенату из расчета получения 20% взвеси.
Приготовленную тем или иным способом суспензию (конечный объем жидкой фазы пробы) распределяют на порции, предназначенные:
- флакон «а» - для постановки РНГА-2 мл;
- флакон «б» - для посева на питательные среды и постановки биопробы на токсины (заражение двух опытных мышей) - 2 мл;
- флакон «в» - для заражения четырех мышей с ослабленной резистентностью к инфекции (биологическое обогащение пробы) - 2,5 мл;
- флакон «г» - для заражения культуры клеток для накопления риккетсий и хламидий-4 мл;
- флакон «д» - для заражения культуры клеток в целях накопления вирусов-8 мл;
- флакон «е» - остаток пробы (резерв на случай повторения или продолжения анализа).
Флакон «а» со взвесью, предназначенной для постановки РНГА, передают в группу индикации ВС без дополнительной обработки.
|
|
Флакон «б» со взвесью, предназначенной для обогащения пробы на питательных средах и постановки биопробы на токсин, передают в первую подгруппу идентификации ВС также без дополнительной обработки.
Во флакон «в» со взвесью, предназначенной для биологического обогащения пробы на белых мышах с ослабленной к инфекции резистентностью, добавляют 2,5 мл поливалентной противоботулинической сыворотки, содержащей 100 - 200 ед/мл антитоксинов к ботулиническим токсинам типов А, В, Е. Смесь пробы с противоботулиническими сыворотками выдерживают 10-15 мин при комнатной температуре, а затем используют для заражения четырех белых мышей.
Во флакон «г» со взвесью, предназначенной для накопления на культуре клеток, содержащихся в пробе риккетсий и хламидий, добавляют 0,1 мл стерильной сыворотки крупного рогатого скота и 0,1 мл смеси растворов антибиотиков, содержащей 4000 ЕД/мл пенициллина и 2000 ЕД/мл стрептомицина. После этого флакон «г» передают во вторую подгруппу идентификации БС.
Во флакон «д» со взвесью, предназначенной для накопления содержащихся в пробе вирусов, добавляют 0,1 мл смеси растворов антибиотиков, содержащей 80000 ЕД/мл пенициллина и 40000 ЕД/мл стрептомицина. После этого флакон «д» передают во вторую подгруппу идентификации БС, проводящую биологическое обогащение материалов проб на клеточных культурах.
Флакон «е» с остатками жидкой фазы пробы хранят в группе первичной обработки проб при температуре 2-40 С до окончания анализа данной пробы и используют при необходимости для повторения или продолжения исследования.
Дата добавления: 2021-11-30; просмотров: 21; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!