Глава 6, Заметка 27. Влияния окружающей среды на поверхностное натяжение мочи 11 страница
Анализ этих случаев выявил две поразительные характеристики. Одна из них - порядок следования по времени трех двухфазных изменений, одинаковых для всех приступов у всех субъектов. Второй - все приступы были качественно различны, хотя и отличались по интенсивности.
В дальнейших исследованиях мы пытались понять значение этих изменений. Подобные изменения, но без присутствия гемоглобина в сыворотке и моче, а только при наличии слабой простуды в виде клинического проявления, могли наблюдаться тогда, когда руки нормальных индивидуумов помещали в ледяную воду на 10 минут. Наблюдались два подобных двухфазных феномена. В то время как их интенсивность была значительно уменьшена, время появления этих двух наблюдавшихся двухфазных феноменов
Рис. 267. У пациента, страдающего hemoglobinuria a frigore, выполнение упражнений после погружения его рук в ледяную воду вызывает выраженную простуду с обильной гемоглобинурией.
было таким же, что и у пациентов с холодовой гемоглобинурией. Это указывает, что лейколиз при hemoglobinuria a frigore соответствует физиологическому ответу, вызывающему гемолиз, поскольку клетки красной крови были сенсибилизированы к холоду. Эта сенсибилизация распознается по результату реакции Donath-Landsteiner. Возможно, что лейколиз освобождает комплемент, необходимый для индукции гемолиза, сенсибилизированных клеток красной крови.
Мы попытались связать эти изменения с другими процессами, встречающимися в нормальной и патологической физиологии. В разных исследованиях мазков крови, полученных во время индуцированного приступа гемоглобинурии, во время наличия лейкопении первой фазы наблюдались ядерные тени. Это явление проявлялось с экспоненциально выраженной интенсивностью во время второго двухфазного комплекса, когда возникала заметная лейкопения. Наши более ранние наблюдения свидетельствовали о корреляции этой лейкопении с лизисом лейкоцитов.
|
|
|
У больных с холодовой гемоглобинурией нам удалось показать, что при выполнении любого физического упражнения после извлечения рук пациента из ледяной воды, даже такого простого, как прогулки по комнате, тяжесть индуцированного приступа была намного больше, чем когда им позволяли отдохнуть в состоянии покоя. Очень возросли не только тяжесть простуды и степень гемоглобинурии, соответствующие второму двухфазному феномену, но и все другие изменения интенсифицировались подобным образом. Количество лейкоцитов уменьшилось до менее чем 200 в 1 мм3. Время свертывания крови доходило до более чем получаса с почти полным отсутствием ретракции сгустков. Антитрипсиновая активность сыворотки, полученная только после центрифугирования, достигла самых низких из наблюдавшихся значений. Рисунки 266 и 267 демонстрируют изменения для одного и того же субъекта, выполнявшего и не выполнявшего физические упражнения. Эти находки могут объяснить наблюдения, указывающие на значение отдыха после проведенных переливаний крови. При прямом переливании 500 см3 крови в течение 10 минут у спокойно отдыхавших пациентов простуда отмечалась редко, в то время как она наблюдалась постоянно у субъектов, выполнявших непосредственно после трансфузии любое упражнение. (Рис. 265)
|
|
|
Рис. 268. Назначение 0.03 г пантопона предотвращает появление клинических признаков после погружения руки в ледяную воду у субъекта страдающего hemoglobinuria a frigore.
Эта связь лейколиза с патогенезом феномена двухфазного комплекса при hemoglobinuria a frigore подтвердилась, когда приступ смог быть предотвращен путем предварительного лечения, повлиявшего на лейкоциты. Изучение влияния, оказываемого разными агентами in vitro на лейкоциты в препарате плеврального экссудата, полученного от кролей, когда добавлялись растворы колларгола, показало, что только морфин и прочие опиумные алкалоиды были способны предотвратить лизис. Адреналин и хинин - среди прочих - оказались неактивными. Назначенные больным пароксизмальной гемоглобинурией, этих, указанных последними, веществ не предотвращало приступов. Тем не менее, морфин в минимальных дозах, таких как 5 мг (1/12 г), или меньше, введенный путем внутривенной инъекции, полностью предотвращал развитие любых клинических проявлений, а также изменения в анализах. Отмечалась минимальная лейкопения, или ее отсутствие, не было изменений времени свертывания, ретракции сгустка, антитрипсиновой активности, индекса рефракции сыворотки, эстеразы и так далее. (Рис. 268)
|
|
|
Была подтверждена гипотеза о влиянии лейколиза на патогенез двухфазного комплекса, доказано значение морфина в предотвращении приступа.
Наличие двух-трех следующих один за другим двухфазных феноменов в случае приступа пароксизмальной гемоглобинурии послужило основой выявления другой важной связи. Как уже указывалось ранее, гемолиз происходил лишь в первой фазе двухфазного феномена. Между комплексами гемоглобин из сыворотки исчезает. Считается, что для индукции гемолиза при холодовой гемоглобинурии необходимо вмешательство двух факторов. Один - это сенсибилизация клеток красной крови, происходящая под влиянием холода, другой - наличие комплемента. Оказалось, что в то время как после экспозиции к холодовому фактору некоторое время персистирует сенсибилизация, гемолиз происходит тогда, когда выполняется и второе условие. Комплемент освобождается в первую фазу двухфазного феномена, поскольку именно в течение первой фазы, когда, благодаря изменениям, индуцированным лизисом лейкоцитов, происходит гемолиз. Связь между указанными выше процессами становится ясной, если учесть, что под влиянием морфина лейколиз не происходит и, таким образом, предотвращается гемолиз.
|
|
|
Глава 9, Заметка 2.Липиды и эритроцитарные столбики, формирование осадка
Кровь человека, полученная путем венепункции, смешивалась в шприце (1/10 его объема 1.5% раствора цитрата натрия), проводилась через несколько центрифужных пробирок и подвергалась разделению на плазму и клетки. Плазма из разных центрифужных пробирок помещалась в отдельные тестовые трубки. Один из этих образцов плазмы обрабатывался смесью конъюгированных жирных кислот жира печени трески, другой - жирокислотным препаратом из плаценты человека, а третий - препаратом неомыляемой фракции плаценты человека. В качестве контроля, плазма обрабатывалась жидким парафином. Смеси, часто встряхиваемые, содержались на теплой бане при температуре 37°C в течение одного часа, после чего они подвергались центрифугированию, и маслянистый препарат отделялся. Плазма, обработанная жирными кислотами, добавлялась затем к образцам необработанной плазмы в пропорции 1/10, которые затем воссоединялись со своими клетками красной крови. Плазма, обработанная неомыляемой фракцией, непосредственно смешивалась со своими клетками красной крови. Плазма и клетки красной крови встряхивались в течение пяти минут и оставлялись при комнатной температуре еще в течение десяти минут. Одна маленькая капля этой крови, полученная платиновой петлей или капиллярной пипеткой, смешивалась с двумя каплями физиологического раствора, помещалась на стекло, покрытое покровным стеклом, и изучалась под микроскопом. В то время как в контролях обнаруживалось несколько невысоких столбиков эритроцитов, в крови, обработанной неомыляемой фракцией, наблюдались разрозненные клетки. В крови, обработанной плацентарными жирными кислотами, почти все эритроциты образовывали столбики; в крови, обработанной жирными кислотами, почти все клетки формировали взвесь.
Глава 9, Заметка 3.Темный цвет крови при шоке
Были предприняты следующие эксперименты для выяснения причины темного окрашивания крови при шоке и роли жирных кислот
Венозная кровь пациентов, находящихся в состоянии тяжелого шока, забиралась и смешивалась с цитратным раствором (1/10 ее объема). Определялась величина гематокрита, добавлялся физиологический раствор для доведения его до величины, свойственной нормальной крови. Через указанные образцы крови в течение 5 минут пропускали кислород в количестве 50 см3 за минуту. В то же время, получалась кровь от нормальных субъектов и обрабатывалась подобным образом. Сравнивались изменения цвета двух образцов после прекращения оксигенации. В то время как для нормальной крови требовалось почти десять минут для возвращения своего предшествующего цвета, кровь пациента, страдающего шоком, возвращала себе интенсивно темный цвет менее чем через три минуты.
Кровь, полученная у больных с шоком, обрабатывалась in vitro неомыляемыми фракциями, а затем в течение 5 минут кислородом, в количестве 50 см3 за минуту. Поскольку цвет немедленно становился красным, время, необходимое для возврата цвета к прежнему, темному, совершенно отличалось от такового для контролей. Для контролей требовалось несколько минут, а для крови, обработанной неомыляемой фракцией - более 12 минут. Из указанных экспериментов следует, что темный цвет крови при шоке является результатом изменений в эритроцитах, а не следствием нарушенной циркуляции, и что эти изменения могут быть связаны с влиянием жирных кислот. Это было подтверждено фактом, согласно которому темная кровь пациентов, находящихся в состоянии шока, при ее обработке vitro неомыляемыми фракциями плаценты, к примеру, утрачивала свой характерный цвет.
Глава 9, Заметка 4.Провоцирование острого шока
Острый шок может быть вызван путем внутрибрюшных инъекций смесей конъюгированных жирных кислот. Применялся главным образом препарат - 10% раствор жира печени трески, конъюгированной путем обработки КОН в этиленгликоле или этиловом спирте, в масле жирной кислоты. Для крысы весом 200 г 8 см3 этого препарата, введенного путем одноразовой инъекции, было достаточно, что бы вызвать острый шок.
Глава 9, Заметка 5.Индукция состояния шока
Состояние шока вызывали повторным назначением смеси конъюгированных жирных кислот, полученных из жира печени трески. Чтобы быть уверенными в прогрессивной системной абсорбции, препарат вводили путем подкожной инъекции. Инъекция крысам 10 % раствора этих жирных кислот в жире в количестве 1 cм3 на 100 г веса тела, повторенная ежечасно, как было показано, вызывала через 3-5 повторений состояние шока. Добавление крысам 4% тиосульфата натрия в дозе 5 cм3 на 100 г веса тела, как было показано, способствовало появлению состояния шока.
Глава 9, Заметка 6. Влияние жирных кислот на травматический шок
Крысы весом 250 г помещались в барабан Collip-Noble Drum с приклеенными передними лапами и подвергались 500 падениям с частотой 40 в минуту. 50% умерли от острого шока менее чем через два часа. При внутриперитонеальной, или даже подкожной, инъекции 2 cм3 препарата жирных кислот, 10% масла печени трески на 100 г веса тела, за полчаса до помещения животных в барабан, более 50% животных погибали в течение самой травмы, и смертность в некоторых экспериментах приближалась к 100%. Кровотечение из носа и рта было темного цвета кровью и в меньшем количестве, чем у нелеченых животных. Если это же количество препарата жирных кислот вводилось животным непосредственно после извлечения их из барабана, это также увеличивало летальность в течение первых двух часов. У некоторых животных смерть наступила через несколько минут после инъекции.
Глава 9, Заметка 7. Влияние неомыляемых фракций на травматический шок
Влияние, оказываемое неомыляемыми фракциями на травматический шок становится очевидным у крыс, подвергнутых 5-700 падениям в барабане Collip-Noble. В этих экспериментах мы использовали 10% растворы неомыляемой фракции плаценты человека или коровы, яиц или сливочного масла в масле сезама. От 1 до 5 см3 этих растворов были введены путем внутрибрюшинной инъекции через разные интервалы до или после травмы. Инъекция 2 см3 за полчаса до травмы полностью предотвращала летальный шок (0/20) в группе экспериментов, где летальность контролей составила 18/20. Подобный результат был получен при инъекции 2-3 см3 препаратов непосредственно после того, как животные были освобождены из барабана. Дозы до 5 см3 препаратов, введенных путем инъекции через час после взятия животных из барабана, защитили только часть из них (11/20) и только из не имевших симптомов шока. При наличии симптомов шока эффект неомыляемых фракций был значительно уменьшен (от 2/20 до 5/20 в разных экспериментах.)
Глава 10, Заметка 1.Щавелевокислотный индекс
Необходимость получения количественной информации о числе двойных связей, присутствующих в организме, или в его жирных кислотах, привело нас к методу анализа, основанному на факте, согласно которому типичные компоненты предоставляются в результате расщепления молекул. При разделении, происходящем на уровне двойных связей, фракция, соответствующая конъюгированной двойной связи будет представлена щавелевая кислотой. Трудно было получить это разделение с карбоксилом, соответствующим каждому атому углерода, без искусственного провоцирования смещений двойной связи, что часто наблюдается в результате лечения.
Мы применили следующую методику. Жирные кислоты, полученные из организма, или любой другой препарат, нейтрализовали с помощью точно необходимого количества карбоната натрия. Это количество было установлено по индексу нейтрализации веществ, подлежащих воздействию. После достаточного разведения избыток карбоната натрия добавляли с целью получения щелочной среды. После доведения раствора до 4°C добавляли перманганат калия до тех пор, пока дальнейшее обесцвечивание перманганата прекращалось, после чего добавляли количество на 20% большее, чем уже применялось. Смесь оставляли в рефрижераторе при температуре 4°C в течение 16 часов, после чего избыток перманганата уменьшали дисульфидом натрия. Полученная жидкость была отфильтрована и преципитат отмыт. Жидкость была экстрагирована сначала эфиром для удаления жирных кислот, после чего она была подвергнута дистилляции с целью удаления летучих жирных кислот. В оставшейся части щавелевая кислота была преципитирована хлоридом кальция. Из преципитата, часть, соответствующая малонату кальция, была отделена от оксалата кальция путем использования разницы в растворимости при температуре кипения. Щавелевая кислота затем подвергалась титрованию обычным способом. Частное от деления количества щавелевой кислоты на количество использованных жирных кислот представляет собой Щавелевокислотный индекс препарата. Carlos Huesca Mejia и Daisy Franco провели широкие исследования изменений этого индекса щавелевой кислоты в наших лабораториях.
Чистые неконъюгированные жирные кислоты, обработанные подобным образом, не дают щавелевой кислоты. Когда линолевая кислота конъюгируется (т. е. путем обработкиKOH в этиленгликоле) щавелевая кислота обнаруживается в продуктах деления в количествах, которые постепенно изменяются по мере продолжения воздействия. (таблица XXXIV)
ТАБЛИЦА XXXIV
КОЛИЧЕСТВО НАЛИЧНОЙ ЩАВЕЛЕВОЙ КИСЛОТЫ ПОСЛЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО РАСЩЕПЛЕНИЯ И ИОДНОЕ ЧИСЛО ПРОБ ЛИНОЛЕВОЙ КИСЛОТЫ, КОНЪЮГИРОВАНОЙ В РАЗНЫЕ ПЕРИОДЫ ВРЕМЕНИ. (ЛИНОЛЕВАЯ КИСЛОТА, СМЕШАННАЯ С РАВНЫМ КОЛИЧЕСТВОМ KOH: РАСТВОРЕННАЯ ДО 5% В ЭТИЛЕНГЛИКОЛЕ; ПРОДОЛЖАЮЩЕЕСЯ ЛЕЧЕНИЕ)
| Щавелевая кислота | Иод | |
| Время | мг/г жирной кислоты | Количество |
| До лечения | 0 | 180 |
| Через 30 минут | 117 | 119.8 |
| Через 1 час | 205 | 115.1 |
| Через 2 часа | 114.2 | 94 |
| Через 4 часа | 119.4 | 96 |
| Через 8 часа | 99.9 | 91 |
| Через 12 часов | 92 | 86 |
| Через 24 часа | 85 | 81.7 |
| Через 36 часов | 80 | 76 |
| Через 48 часов | 77.3 | 76.5 |
| Через 144 часа | 40.8 | 57.3 |
Подверглась исследованию количественная связь между известными пропорциями конъюгированных жирных кислот и щавелевой кислотой, полученная путем изучения их окислительного расщепления.
Было обнаружено влияние аутолитических изменений на происхождение жирных кислот, экстрагированных из тканей. Исследования показали, что связывание формалина не меняет значительно присутствующие жирные кислоты. (ТАБЛИЦА XXXV)
Уже отмечалось, что для конъюгации жирных кислот нормальных тканей необходимы относительно более сильные методы конъюгации, использующие KOH в более высокой концентрации и более высокой температуре, чем нужны для жирных кислот, экстрагированных из патологических тканей (ожог, шок, адреналэктомия, некроз опухоли), которые могут быть конъюгированы много более слабыми процедурами.
682 / RESEARCH IN PHYSIOPATHOLOGY
таблица XXXV
Влияние формалина на количество щавелевой кислоты, полученной путем окислительного расщепления смеси конъюгированных жирных кислот. (Смесь конъюгированных жирных кислот, кратная количеству 5 см3, перемешивалась в стопперном цилиндре с 10 см3 20% раствора формальдегида. Цилиндр встряхивали и пробы отбирались с частыми интервалами для определения щавелевой кислоты.)
| Время | мг щавелевой кислоты/г жирных кислот |
| Перед перемешиванием | 121.7 |
| Через 1 час | 121.8 |
| Через 24 часа | 120.5 |
| Через 48 часов | 120.9 |
| Через 72 часа | 118.9 |
| Через 144 часа | 121.9 |
Глава 10, Заметка 2.Облучение и щавелевокислотный индекс
Сорок самцов-альбиносов крыс, поделенных на группы по десять, были подвергнуты облучению нефильтрованными рентгеновскими лучами из 200,000- вольтного аппарата, получая за один сеанс дозу в 1500 р, которая считается летальной. Подобные эксперименты были проведены повторно несколько раз, некоторые путем получения дозы радиации от источника радиоактивного кобальта. Эти четыре группы животных сначала были все перемешаны, а затем разделены на четыре большие группы, содержавшиеся отдельно в клетках. Животные основной и контрольной групп содержались на Purina Chow и воде ad libitum. Ежедневно умерщвлялись два животных контрольной группы, два леченных животных и любые другие умирающие.
Каждое умершее животное подвергалось омылению отдельно. Общее количество экстрагированных кислотных липидов подверглось анализу на предмет конъюгированных жирных кислот, используя метод, указанный ранее, при котором измерялось количество щавелевая кислоты, появляющееся в результате окислительного разложения. Величины выражали в щавелевокислотном индексе, который соответствует количеству щавелевой кислоты в миллиграммах на грамм жирных кислот. Рисунок 85 демонстрирует результаты двух экспериментов.
Величины, обнаруженные у нормальных субъектов, составляли ноль или менее 0.5, но после облучения было отмечено постоянное увеличение индекса щавелевой кислоты. В течение первых трех дней отмечались неправильные величины, на четвертый день все были выше 3 и продолжали постоянно увеличиваться в дальнейшем. При достижении критической точки, соответствующей индексу щавелевой кислоты, приравненному к 14-17 мг кислоты на 1 г жирных кислот всего тела, случалась смерть.
Глава 10, Заметка 3. Индекс щавелевой кислоты при сублетальном облучении
Дата добавления: 2018-02-15; просмотров: 315; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!