Основные этапы производства лизина микробиологическим путем

Изм. Лист № докум. Подпись Дата Лист 1 КП 01 00 ПЗ Разраб. Черткова Провер. Остроух Реценз. Н. Контр. Утверд. Остроух Выбор и обоснование технологической схемы. Патентная проработка Лит. Листов 12 БГТУ314061217 1 Выбор и обоснование технологической схемы. Патентная проработка

Выбор и обоснование технологической схемы

Промышленное получение лизина

Существуют два способа промышленного получения лизина с помощью микроорганизмов: двухступенчатый и одноступенчатый.

Двухступенчатый способ предусматривает использование в качестве основного сырья предшественников L-лизина, полученных химическим или биологическим методом. Химическое или биологическое получение и подготовка предшественника в этом способе является первой ступенью производства. Сюда же входит подготовка ферментного препарата, с помощью которого будет происходить трансформация предшественника в L-лизин. Для этого выращивается соответствующий продуцент ферментов, вернее, получается биомасса микроорганизма, обладающая требуемым комплексом ферментов. Биомасса отделяется от культуральной жидкости и используется либо непосредственно для трансформации, либо клетки предварительно разрушаются.

Второй стадией этого способа является трансформация предшественника с помощью ферментов, заключенных в биомассе микроорганизма, в L-лизин. В качестве продуцентов нужного комплекса ферментов используются E.coli, Аrthrobacter, Saccharomyces cerevisiae, Corynebacterium glutamicum, Brevibacterium flavum и др.

Одноступенчатый способ получения L-лизина микробиологическим путем представляет собой выращивание на специально подобранной среде микроорганизма, обладающего способностью к сверхсинтезу L-лизина, т.е. ауксотрофного мутанта с нарушенным синтезом гомосериндегидрогеназы, способного образовывать L-лизин свыше 40 г/л.

Для промышленного получения L-лизина можно также использовать мутанты с нарушенным синтезом гомосеринкиназы, первого фермента треониновой ветви биосинтеза, которые образуют лизина до 15-26 г/л.

Большинство продуцентов лизина обладают чрезвычайно неустойчивым аминокислотным обменом, подверженным воздействию внешних условий: состава питательной среды, количества растворенного в среде кислорода, температуры, pH среды, длительности культивирования, количества посевного материала и т. д.

Продуценты лизина являются ауксотрофными мутантами с нарушенным биосинтезом ряда аминокислот. Поэтому для обеспечения нормального развития микроорганизмов требуется введение в состав среды биотина и гомосерина. Гомосерин, по данным многих авторов, может быть заменен суммой двух аминокислот — треонином и метионином. Но концентрация треонина в составе среды должна быть точно регламентирована: введение очень малого количества треонина будет тормозить рост микроорганизма, а избыток повлечет за собой снижение продуктивности мик-

роорганизма по лизину. Экспериментально установлено, что наиболее приемлемой концентрацией L-треонина для различных мутантов является 0,2-0,8мг/мл.

Все продуценты лизина являются биотинзависимыми микроорганизмами. Количество биотина в среде должно быть сравнительно высоким, обычно значительно выше(20мкг/л), чем это необходимо для нормального роста и развития микробной клетки(4-5мкг/л). Если же снизить количество биотина до 1-2 мкг/л, биосинтез лизина снижается в 20-30 раз, но одновременно резко повышается биосинтез глутаминовой кислоты. В культуральной жидкости ее накапливается до 20-30 г/л. Высокая концентрация биотина в среде способствует образованию цитоплазматической мембраны, легко проницаемой для основных аминокислот, таких как лизин, и трудно проницаемой для кислых и нейтральных аминокислот. В результате в такой культуре создаются благоприятные условия для образования повышенного количества внеклеточного лизина за счет высокой концентрации внутриклеточной глутаминовой кислоты, которая является необходимым поставщиком аминных групп при образовании аспарагиновой кислоты и в ряде других превращений цепи образования L-лизина.

Помимо гомосерина, треонина и биотина продуценты лизина, относящиеся к роду Brevibacterium, требуют в питательной среде обязательного присутствия витамина B1(тиамина). Если в среде отсутствует тиамин, то культура плохо растет и вместо L-лизина преимущественно образуется L-аланин. Источниками биотина и тиамина в промышленных питательных средах обычно являются кукурузный экстракт и свекловичная меласса.

В промышленные среды обычно не добавляют чистые аминокислоты. Их содержание в питательной среде пополняется за счет введения богатых аминокислотами отходов различных производств, а также гидролизатов белоксодержащего сырья: кукурузный и рыбный экстракты; гидролизаты шротов, остающихся после извлечения жиров из арахиса, сои, подсолнечника; гидролизаты отходов молочной промышленности, содержащих казеин, рыбной муки, кормовых дрожжей. Дозировка этого сырья определяется, исходя из содержания необходимых для биосинтеза лизина аминокислот.

Для нормального роста, развития культуры и биосинтеза ею L-лизина необходимо в состав среды вводить источники углерода. Хорошими источниками углерода являются моно- и дисахариды: глюкоза, фруктоза, сахароза и мальтоза.

Концентрация углевода в среде существенно сказывается на биосинтезе L-лизина. С увеличением его концентрации количество лизина в среде возрастает, но не всегда это экономически целесообразно, так как с повышением концентрации, например, сахарозы в среде степень его использования микроорганизмом падает. Считается, что процесс с наибольшим экономическим эффектом идет, если концентрация усваиваемого углевода находится в пределах 10-12%. Условия биосинтеза улучшаются, если углеводы вводятся дробно, по мере их потребления из среды.

В промышленных условиях в качестве источника углеводов применяют свекловичную или тростниковою мелассу, гидрол (отходы при производстве сахара), различные гидролизаты целлюлозосодержащего сырья (хлопковой шелухи, древесины, кукурузной кочерыжки), а также гидролизаты крахмала. Наилучшие результаты получаются при выращивании продуцентов лизина на мелассе, которая вносится в состав среды в количестве 15-20%. Недостатком данного сырья являются большие различия от партии к партии, которые могут приводить к существенному снижению выхода лизина. В среднем выход лизина на мелассах составляет 25% от введенного в процесс сахара, а для некоторых мутантов он может достигать 30-33%.

Возможным является использование в качестве источника углерода нормальных углеводородов (газообразные, жидкие и твердые) и производных природного газа этилена (уксусная кислота, этанол и этиленгликоль). При таком источнике углерода используются гомосериновые и треониновые мутанты специальных видов микроорганизмов, усваивающих углеводороды. Углеводороды могут быть использованы в качестве единственного источника углерода или же в сочетании с углеводами или с окисленными формами углеводородов. Считается, что самым перспективным является ацетат, на котором большинство известных продуцентов, а также ряд специальных видов микроорганизмов хорошо растут и образуют лизина до 20-90г/л.

При использовании сред с ацетатом снижается потребность микроорганизмов в биотине до 1мкг на 1 л питательной среды. Но при выращивании на ацетатных средах есть некоторые сложности. Ацетат угнетает биосинтез ферментов цикла трикарбоновых кислот, и потому его повышенное содержание в среде вызывает снижение лизинообразования у микроорганизмов. Предельно допустимое содержание ацетата в среде не превышает 2%. Поэтому при культивировании необходимо осуществлять дробную подачу уксусной кислоты или ее солей. Часто используют смесь кислоты и ацетата натрия или кислоты и ацетата аммония в определенных соотношениях, устанавливаемых для каждого штамма экспериментально, но при всех условиях концентрация ионов ацетата в пересчете на уксусную кислоту не должна превышать 1,5-2,0%. Введение в среду небольшого количества сахара, например глюкозы 1-6% (к ацетату), способствует повышению выхода лизина на 30-50%. Выход лизина в пересчете на потребленный ацетат составляет 25-27%. На этой среде также требуется соблюдение определенного соотношения дефицитных аминокислот.

Таким образом, в зависимости от используемого продуцента могут применяться в промышленных условиях самые разные источники углерода: моно- и дисахариды, гидролизаты полисахаридов, различные углеводороды и некоторые их окисленные формы. Количество источника углерода, технология его внесения в среду и степень его использования на биосинтез лизина зависят от физиологических особенностей данного продуцента и от адаптации его к данному субстрату.

Источник азота обычно вносят в состав среды либо в виде солей аммония, или в виде мочевины. Однако для каждого промышленного штамма преимущества той или иной соли определяются экспериментально. Многие продуценты лизина обладают уреазной активностью и потому могут использовать мочевину в качестве источника аммонийного азота.

Большое значение имеет также соотношение углерода и азота в среде. Оптимальное соотношение для каждого штамма — свое, и отклонение от него приводит к нарушению биосинтеза лизина. В питательной среде источниками азота могут быть аминокислоты, мочевина или соли аммония.

Для продуцентов лизина необходимо в состав среды вводить фосфор в виде калиевых солей фосфорной кислоты, но количество фосфора в среде должно быть регламентировано(8-20 мг%), 10-кратное повышение его концентрации приводит для Coryn. glutamicum к снижению синтеза лизина почти на половину, поэтому фосфорнокислый аммоний нельзя использовать в качестве источника азота. Продуценты лизина испытывают потребность в ряде макро- и микроэлементов: магнии, железе, меди, марганце. Магний вводится в виде соли серной кислоты в количестве от 0,03 до 0,05%, остальные соли вносят в среду также в виде сульфатов, но их количество значительно меньше — (0,0008 - 0,001) %. Обычно железо, медь и марганец специально в среды не вносят, они есть в достаточных количествах в кукурузном экстракте, мелассе и других компонентах среды.

Условия культивирования определяются pH среды, степенью аэрации среды, длительностью и температурой ферментации, возрастом и дозой посевного материала. Все эти факторы оказывают существенное влияние на биосинтез лизина.

Большинство продуцентов лизина являются мезофильными микроорганизмами, имеющими оптимум роста, развития и биосинтеза лизина при температуре 28-30˚C. Отклонения от этой температуры нежелательны. Повышение температуры на 5-7˚C от оптимальной приводит к быстрому автолизу культуры, и в среде накапливается значительно меньше лизина. Понижение температуры на 4-6˚C также невыгодно, так как культивирование резко затягивается на 12-20 ч, хотя выход лизина при этом почти не падает.

Уровень pH среды — это очень ответственный параметр процесса. Как известно, продуцентами являются бактериальные штаммы, и потому в большинстве случаев оптимум pH для культивирования лежит в области, близкой к нейтральной или слабощелочной. Наилучшие результаты по биосинтезу лизина получаются, если pH среды поддерживается около 7,2±0,2, а для Brevibacterium 22 и Brevibacteriumflavum — в интервале 7-7,6. Для всех известных продуцентов лизина pH, обеспечивающий максимальное накопление лизина и рост культуры, лежит в пределах 6-8,5.

Снабжение растущей культуры кислородом является ответственным и важным фактором, влияющим на рост микроорганизма и образование им лизина. Кислород, используемый бактериальной клеткой, должен быть растворен в питательной среде. Для увеличения растворимости кислорода осуществляют барботирование среды воздухом с одновременным ее перемешиванием. В зависимости от систем и конструкций аэрирующих и перемешивающих устройств количество растворенного кислорода в среде будет различным. Различные продуценты лизина испытывают неодинаковую потребность в кислороде, но, учитывая, что процесс биосинтеза лизина связан с высокой активностью дегидрогеназ цикла трикарбоновых кислот и с активностью ферментов глиоксилатного цикла, все они нуждаются в интенсивной аэрации. Недостаточная аэрация приводит к усилению образования аланина и молочной кислоты за счет снижения выхода лизина, что крайне нежелательно. Но в то же время степень аэрации должна быть вполне определенной, так как интенсивная аэрация приводит к усиленному росту самой культуры, выход же лизина начинает падать так же, как и при недостаточной аэрации.

У продуцентов лизина накопление биомассы и аминокислоты не совпадает по времени: биомасса накапливается в первые 12-18 ч, а целевой продукт — лизин — начинает образовываться лишь тогда, когда рост биомассы замедляется. В период отсутствия биосинтеза лизина клетки продуцента крупные; когда же начинается образование лизина, они заметно уменьшаются. Наиболее характерным признаком начала биосинтеза является почти полное потребление из среды треонина. Длительность культивирования 68-72 ч.

Основные этапы производства лизина микробиологическим путем

В отличие от производства кормовых дрожжей промышленное получение лизина осуществляется в строго асептических условиях, на стерильных питательных средах с использованием чистой культуры продуцента. Принципиальная технологическая последовательность процесса получения лизина следующая: приготовление посевного материала; приготовление и стерилизация питательной среды, всей аппаратуры и коммуникаций; культивирование в промышленных ферментаторах; выделение целевого продукта.

1.1.2.1 Приготовление посевного материала

Посевная культура продуцента может быть приготовлена двумя способами: периодически и непрерывно. Приготовление посевной культуры преимущественно ведется периодическим методом.

Свободная от фага и посторонней микрофлоры исходная культура продуцента с чашек Петри с агаром Хоттингера пересевается в пробирки с 2 %-ным мясопентоновым агаром и выращивается в течение суток при температуре 29-30 ^○С. На основе этой культуры готовят на стерильной водопроводной воде суспензию плотностью 10⁸ клеток на 1 мл (ориентировочно 8-10 мл воды на 1 пробирку). Этой суспензией засевают стерильную питательную среду в качалочных колбах. Для получения посевного материала используют среды различного состава, чаще всего в среду входят меласса (3-5 %), кукурузный экстракт (2,5-3,0 %) и поваренная соль (до 0,4 %). Среда подтитровывается 20 %-ным раствором едкого натра до величины рН 7-7,2. В качалочные колбы объемом 750 мл заливают по 100-200 мл среды и стерилизуют в автоклаве. После охлаждения среда в каждой колбе засевается 2 мл посевной суспензии и культура выращивается в течение суток на качалках (180-200 об/мин) при температуре 29-30^○С — это так называемые маточные посевные колбы. Затем производится засев посевных колб со средой такого же состава, засев осуществляется из расчета 5 % из маточной односуточной культуры. Посевные колбы также выращиваются на качалках сутки при температуре 30 ^○С. Посевными колбами засевается первый инокулятор из расчета 0,05-0,1 % по объему, где культура выращивается сутки при аэрации и перемешивании при 29-30 ^○С. В инокуляторе состав среды может быть таким же или другим, более близким к производственной питательной среде. Состав среды для каждого продуцента устанавливается экспериментально.

Посевная среда обычно стерилизуется в посевном аппарате. Если производственные ферментаторы очень большой емкости или производительность завода велика, то может быть еще одна ступень инокуляторов, объемы которых больше предыдущих, так как количество задаваемой в аппарат посевной культуры сравнительно высоко — от 1 до 5% по объему, а для ряда продуцентов может быть 20-30%. Следует помнить, что при периодическом способе получения посевной культуры независимо от количества стадий длительность выращивания продуцента на каждой стадии будет 16-24ч.

Инокуляторы или посевные ферментаторы имеют сравнительно простые конструкции. Главное требование — это минимальное количество штуцеров, смотровых окон, люков, отсутствие вращающихся деталей, надежные устройства для герметизации ферментатора. Готовая посевная культура независимо от способа ее выращивания должна быть свободна от фага, посторонней микрофлоры и иметь титр около 10⁹ клеток на 1 мл.

1.1.2.2 Приготовление и стерилизация питательной среды, аппаратов и коммуникаций

Питательная среда для выращивания продуцентов лизина состоит из уксусной кислоты, кукурузного экстракта или другого источника ростовых веществ, аммиачной воды и пеногасителя. Питательная среда готовится и стерилизуется в две стадии с учетом свойств компонентов, входящих в ее состав. Стадия подготовки и стерилизации среды состоит из смешивания компонентов питательной среды в определенной пропорции с помощью специальных дозаторов в реакторе, растворения солей при перемешивании, нагрева до температуры стерилизации, выдержки при этой температуре и охлаждение до температуры, при которой проводится культивирование продуцента лизина.

В производстве лизина используется меласса, содержащая термолабильный компонент — сахарозу. Поэтому ее стерилизуют отдельно. В реактор, снабженный мешалкой, подают мелассу и нагревают ее при постоянном размешивании до температуры 80^○С, смешивая ее с водой согласно имеющейся рецептуре, затем ее быстро разогревают до температуры 120-122 ^○С в специальном аппарате и выдерживают при этой температуре определенное время, необходимое для полной гибели всей микрофлоры. Остальные компоненты среды также в реакторе с перемешиванием смешивают и растворяют в воде с подогревом, нагревают в специальном аппарате до температуры стерилизации, выдерживают при ней и охлаждают. Длительность стерилизации значительно меньше, но температура выше.

Пеногаситель часто стерилизуют отдельно, особенно в том случае, когда им является масло или жир. Режимы стерилизации (температура и длительность) при обработке пеногасителя более жесткие, чем это принято для стерилизации любых питательных сред.

Процесс получения лизина требует строгих асептических условий, и поэтому особое внимание уделяется стерилизации не только среды, но и всех реакторов, коммуникаций, подаваемого воздуха. При стерилизации аппаратуры режимы стерилизации зависят главным образом от материала, из которого изготовлены его части. Самая эффективная обработка аппаратуры и коммуникаций — под давлением острым паром при температурах около 135-140 ^○С. Но отдельные блоки аппаратов, в том числе датчики измерительных приборов, не выдерживают таких условий стерилизации, и поэтому в этих случаях могут применяться «холодные» способы стерилизации. Для такой обработки могут быть использованы бактерицидные газы (этилен) и растворы химических реагентов. После «холодной» стерилизации остатки химических реагентов должны быть удалены промывкой стерильной водой.

Степень стерильности среды, оборудования и коммуникаций может быть проверена. Простерилизованную среду или смывы, произведенные стерильной водой с внутренних поверхностей аппаратов и трубопроводов, высевают на агаризованные или жидкие питательные среды и инкубируют в термостате сутки. Если среды остаются стерильными, то стерилизация проведена качественно. Такой анализ проводится при пуске завода, в случае появления инфекции и периодически в профилактических целях.

1.1.2.3Культивирование продуцента в промышленных ферментаторах

Выращивание производственной культуры продуцента лизина осуществляется в подавляющем большинстве случаев периодическим способом в ферментаторах. В отличие от аппаратов, используемых при производстве кормовых дрожжей, эти реакторы сравнительно меньших габаритов и имеют объемы 50, 63 и 100 м³. Они все предназначены для выращивания культуры в асептических условиях со строгим соблюдением герметизации процесса. Ферментаторы снабжены необходимыми коммуникациями, системой подачи стерильного пеногасителя, охлаждающими устройствами и устройствами для перемешивания и введения в питательную среду стерильного воздуха, дополнительных питательных ингредиентов, а также растворов кислот и щелочей для поддержания pH среды на заданном уровне.

Стерильная среда в ферментатор может вводиться при температуре, близкой к температуре выращивания продуцента (32-35 ^○С), или с температурой около 80^○С. В этом случае для окончательного охлаждения аппарата и среды используются теплообменные устройства самого ферментатора.

Когда температура среды достигает оптимальной, из посевного ферментатора вводят посевной материал и тут же начинают аэрировать содержимое ферментатора. Коэффициент заполнения аппарата 0,65-0,75 в зависимости от степени пенообразования в данных условиях культивирования.

В ферментаторе устанавливают определенный режим культивирования в зависимости от особенностей продуцента. Для продуцентов лизина длительность ферментации 58-72 ч.

В первые сутки микроорганизмы ассимилируют приблизительно 25 % от общего азота среды, углеводов и почти все аминокислоты, накапливается почти вся биомасса. Вторая стадия роста культуры сопровождается резким замедлением накопления биомассы и самыми высокими скоростями биосинтеза лизина. Питательная среда очень сильно истощается, изменяется рН среды. В это время целесообразно проводить подтитровывание среды 25 %-ным раствором аммиака или 15 %-ным раствором NaOH с целью стабилизации рН и осуществлять дополнительное введение питательных веществ (подпитка). Последняя стадия выращивания продуцента лизина характеризуется некоторой убылью биомассы за счет небольшого автолиза клеток и резким снижением скорости накопления лизина.

Как уже говорилось выше, на биосинтез лизина существенное влияние оказывают аэрация и перемешивание. Поэтому на всех стадиях процесса все параметры культивирования строго регламентируются и контролируются (температура, рН, изменение основных компонентов среды, накопление лизина, аэрация, перемешивание и т.д.).

При периодическом способе культивирования продуцента через 58-72 ч концентрация лизина в культуральной жидкости достигает 25-40 г/л, биомассы по сухой массе накапливается 10-15 г/л, экономический коэффициент по потреблению сахара и пересчете на лизин составляет 25-35 %.

Готовая культуральная жидкость помимо лизина содержит биомассу продуцента, остатки не потребленных питательных веществ среды, продукты обмена веществ.

1.1.2.4 Выделение целевого продукта

На основе культуральной жидкости получают технические препараты в виде жидкого концентрата лизина (ЖКЛ) и сухого кормового концентрата лизина (ККЛ), а также кристаллический лизин.

Для кормовых целей целесообразнее получать технические препараты ЖКЛ и ККЛ, так как они содержат помимо лизина значительное количество других очень важных для животного организма соединений, в частности витамины: рибофлавин, пантотеновую кислоту, фолевую кислоту, ннкотнпамид и др.

Технические препараты лизина получают на основе всей суммы веществ, присутствующих в культуральной жидкости, включая биомассу продуцента и твердые нерастворимые частицы среды. Так как культуральная жидкость имеет сравнительно низкое содержание сухих веществ (10-13%) и не обладает стабильностью при хранении, поэтому необходимо увеличить концентрацию сухих веществ методом выпаривания или высушивания Готовая культуральная жидкость перед концентрированием должна содержать минимальное количество редуцирующих сахаров, так как они могут образовывать в процессе конценрирования с участием ε-аминогруппы лизина соединения, не усваиваемые животными, т. е. происходит безвозвратная потеря целевого продукта.

Для стабилизации лизина культуральную жидкость подкисляют соляной кислотой до рН 5,0 и добавляют 25%-ный раствор метабисульфита натрия в количестве 0,4%. Далее стабилизированную культуральную жидкость выпаривают в вакуум-выпарной установке до концентрации сухих веществ 35-40%. Потери лизина на этой операции составляют от 5 до 15%. Вязкость ЖКЛ 0.648Х Х10 ' кг/(м-с), замерзает он при — 18°С, удельная масса 1,150-1,300, рН 4,5-6,0.

Жидкий концентрат лизина (ЖКЛ) хорошо сохраняется в течение 3—4 мес. Считается, что он обладает большей биологической ценностью, чем сухой ККЛ.

Патентная проработка

Патентный поиск проведен в направлении современных решений по модернизации используемого оборудования и методов производства L-лизина. Патенты представлены в таблице 1.1.

Таблица 1.1 — Патентный поиск

Номер патента (авторского свидетельства), страна, дата подачи, класс МПИ или НКИ	Название патента (авторского свидетельства), авторы	Краткое описание изобретения
1	2	3
RU 2549690 РФ 08.10.2013 C12P13/08	L-лизин-продуцирующая бактерия corynebacterium glutamicum или brevibac-terium flavum, устойчивая к фузидиновой кислоте, и способ микробиологиче-	Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой способ получения бактерии или Brevibacterium flavum с Corynebacterium glutamicum

Продолжение таблицы 1.1

1	2	3
C12N1/20	ского синтеза l-лизина с ее использованием Рябченко Л. Е. (RU) Раевская Н. М. (RU) Губанова Т. А.(RU) Барсуков Е. Д. (RU) Демина Н. Г. (RU) Акишина Р. И.(RU) Герасимова Т. В. (RU) Иванкова Т. А. (RU) Леонова Т. Е. (RU) Яненко А. С. (RU) Глазунов А. В. (RU) Тарутина М. Г. (RU) Румянцева Н. Ф. (RU)	повышенным уровнем синтеза L-лизина, включающий высев культуры бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum, способной продуцировать L-лизин, на среду, содержащую фузидиновую кислоту, и отбор среди выросших колоний таких, которые обладают повышенным уровнем синтеза L-лизина. Изобретение относится также к способу микробиологического синтеза L-лизина путем культивирования бактерии, полученной указанным способом. Изобретение позволяет получать L-лизин с высокой степенью эффективности. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 8 пр.
RU 2612159 РФ 28.12.2015 C12N 15/77 C12N 1/21 C12P 13/08	L-Лизин-продуцирующая коринеформная бактерия с мутантным геном fusA и способ получения L- лизина с использованием этой бактерии Токмакова И.П. (RU), Рябченко Л. Е. (RU), Герасимова Т. В.(RU), Яненко А. С. (RU)	1. L-Лизин-продуцирующая бактерия, принадлежащая к роду Corynebacterium и модифицированная таким образом, что в аминокислотной последовательности продукта мутантного гена fusA в 461 положении аминокислотный остаток гистидина заменен на аминокислотный остаток глутамина. 2. L-Лизин-продуцирующая бактерия, принадлежащая к роду Brevibacterium и модифицированная таким образом, что в аминокислотной последовательности продукта мутантного гена fusA в 461 положении аминокислотный остаток гистидина

Продолжение таблицы 1.1

1	2	3
		заменен на аминокислотный остаток глутамина. 3. Способ получения L-лизина, включающий культивирование бактерии по п. 1 или п. 2 в подходящих условиях и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости.
RU 2615454 КР 21.12.2012 C12N 15/52 C12P 13/08 C12N 1/21 C12N 15/77	Способ получения L-лизина с использованием микроорганизмов, обладающих способностью продуцировать L-лизин ДЖАНГ Джае Ву (KР) МУН Джун Ок (KР) ПАРК Сан Хи (KР) ЛИМ Санг Йо (KР) ЛИ Кван Хо (KР) ПАРК Су Джин (КР)	Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой модифицированный полинуклеотид, кодирующий аспартаткиназу (LysC), где инициирующий кодон полинуклеотида заменен на ATG. Изобретение относится также к вектору экспрессии, содержащему такой модифицированный полинуклеотид, а также к модифицированному микро-организму рода Corynebacterium для продукции L-лизина, который обладает повышенной активностью аспартаткиназы по сравнению с ее эндогенной активностью, где инициирующий кодон полинуклеотида, кодирующего аспартаткиназу, заменен на ATG. Изобретение позволяет получать L-лизин с высокой продуктивностью. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 10 табл., 11 пр.
RU2624002C2	Способ получения лизина фармакопейной кондиции	Изобретение относится к области пищевой промыш-

Продолжение таблицы 1.1

1	2	3
РФ 24.06.2014 C07C227/40 C07C229/26	из кормового лизина Кисиль Н. Н. Тер-Саркисян Э. М.	ленности и медицины, кон-кретно к способу получения L-лизина фармакопейной кондиции из кормового лизина. Способ характеризуется тем, что раствор кормового лизина обрабатывают последовательно при температуре 70-80°С гашеной известью и ортофосфорной кислотой до рН 7,0-7,2, осадок отделяют путем вакуум-фильтрации, тяжелые металлы удаляют, пропуская раствор лизина через ионообменную колонну со смолой Ку-2х8 в лизиновой форме. Затем раствор лизина осветляют на колонне с осветляющей феноло-формальдегидной смолой ИА-4, отвержденной уротропином, и сушат на распылительной сушилке. Предлагаемый способ позволяет получать высокоочищенный L-лизин фармакопейной кондиции. 1пр.
RU2584593C2 КР 10.01.2012 C12N15/74 C12N9/1205 C12N9/92 C12P13/08 C12Y207/01017 C12Y503/01005	Микроорганизмы Corynebacterium, способные утилизировать ксилозу, и способ получения L-лизина с применением таких микроорганизмов Со Йон РА Лан ХУ Чан Гем КИМ Кван Хо ЛИ Джун Ок МУН Кьюн Хан ЛИ Джин Сок СУН	Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой модифицированный Corynebacterium glutamicum, способный продуцировать L-лизин посредством утилизации ксилозы, в который введены активности ксилозоизомеразы (XylA) и ксилулокиназы (XylB), имеющие происхождение из Erwinia carotovora. Настоящее изобретение также относится к способу получения L-лизина,

Продолжение таблицы 1.1

1	2	3
	Хюнг Чун КИМ	включающему стадию культивирования указанного моди-фицированного микроорганизма, использующего ксилозу в качестве источника углерода, и выделения L-лизина из культуры. Изобретение позволяет получать L-лизин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 6 табл., 9 пр.

Дата добавления: 2018-02-15; просмотров: 9798; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

Мы поможем в написании ваших работ!