ПРОБОПОДГОТОВКА ДЛЯ АНАЛИЗА МЕТОДОМ ГХ-МС
К 3 мл мочи добавляли 1 г хлорида натрия, 50 мкл 25% раствора аммиака, 50 мкл раствора дифениламина (внутренний стандарт в концентрации 100 мкг/мл) и 2,5 мл смеси этилацетат-диэтиловый эфир (1:1). Экстрагировали в течение 10 минут при перемешивании в шейкере, затем разделяли слои центрифугированием в течение 10 минут со скоростью 3500 об./мин. Органический слой переносили в стеклянные виалы, упаривали досуха под вакуумом и растворяли остаток в 100 мкл этилацетата. В хроматограф вводили 2 мкл полученного раствора.
ПРОБОПОДГОТОВКА ДЛЯ АНАЛИЗА МЕТОДОМ ВЭЖХ-МС/МС
В центрифужные пробирки вместимостью 2 мл помещали 0,4 г натрия хлорида, 300 мкл интактной или исследуемой мочи и 900 мкл ацетонитрила, перемешивали на встряхивателе типа “Vortex” в течение 10 секунд, а затем центрифугировали в течение 15 минут со скоростью 14 500 об/мин. Далее 500 мкл верхнего (органического) слоя жидкости переносили в хроматографические виалы и помещали в автосамп- лер хроматографа.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ТСХ-ОБНАРУЖЕНИЯ КЛОЗАПИНА, ОЛАНЗАПИНА, КВЕТИАПИНА И РИСПЕРИДОНА
Выбор подвижной фазы проводился с учетом влияния состава и полярности на подвижность веществ и разрешающую способность хроматографической системы. Результаты анализа клозапина, оланзапина, кветиапина и рисперидона методом ТСХ в сравниваемых системах, значения Rf и времена хроматографирования, установленные в ходе эксперимента, представлены в табл. 3.
|
|
|
Как видно из табл. 3, наиболее полно удовлетворяет запросам химико-токсикологической диагностики острых отравлений система этилацетат-метанол — 25% раствор аммиака (85:10:5): она обеспечивает достаточное разделение всех четырех веществ; хроматографи-
Таблица 1
Градиент состава подвижной фазы при анализе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией
Table 1
Gradient composition of the mobile phase for analysis with
HPLC-MS/MS method
| Длительность анализа, мин | Объемная доля элюента В, % |
| 0,00 ^ 0,50 | 5 |
| 0,50 ^ 3,50 | 5 ^ 55 |
| 3,50 ^ 4,00 | 55 ^ 100 |
| 4,00 ^ 5,50 | 100 |
| 5,50 ^ 6,50 | 100 ^ 5 |
| 6,50 ^ 8,00 | 5 |
Таблица 2
Параметры детектирования оланзапина, клозапина и кветиапина в режиме MRM+
Table 2
Detection parameters of olanzapine, clozapine and quetiapine in MRM+ mode
| Ион-предшественник, m/z | Фрагментный ион, m/z | Энергия соударений, В |
| Оланзапин | ||
| 312,95 | 255,95 | -24,0 |
| 312,95 | 84,10 | -24,0 |
| Кветиапин | ||
| 383,95 | 279,00 | -27,0 |
| 383,95 | 253,00 | -25,0 |
| Клозапин | ||
| 326,90 | 270,05 | -24,0 |
| 326,90 | 191,95 | -46,0 |
Таблица 3
Значения Rf клозапина, оланзапина, кветиапина и рисперидона в различных системах растворителей
|
|
|
Table 3
The values of Rf for clozapine, olanzapine, quetiapine, risperidone in various solvent systems
Название Значение Rf в системе растворителей
| вещества | Толуол-ацетон- этанол — 25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5) | Толуол-ацетон — 25% раствор аммиака (50:50:1) | Хлороформ- этанол (7:3) | Этилацетат-ме- танол — 25% раствор аммиака (85:10:5) |
| Клозапин | 0,47 | 0,37 | 0,67 | 0,56 |
| Оланзапин | 0,40 | 0,26 | 0,56 | 0,43 |
| Кветиапин | 0,50 | 0,37 | 0,84 | 0,66 |
| Рисперидон | 0,28 | 0,44 | 0,73 | 0,30 |
| Длительность хроматографирования, мин | 12 | 14 | 8 | 16 |
ческие зоны имеют четкие контуры и высокую плотность. Данная подвижная фаза представляет собой общую систему растворителей для веществ основного характера. Ее использование в условиях ненаправленного химико-токсикологического исследования позволяет выявлять клозапин, оланзапин, кветиапин и рисперидон наряду с другими лекарственными веществами, не изменяя общего хода исследования. Длительность хроматографирования равно 16 минутам, что удовлетворяет требованию экспрессности.
Для обнаружения исследуемых веществ хроматографические пластины просматривали в УФ-свете при длине волны 254 нм. Наблюдали гашение флуоресценции зон всех четырех препаратов в относительно широком диапазоне их концентраций в пробе. Экспериментально доказана возможность выявления клозапина и оланзапина в сравнительно небольших количествах (0,02 мкг и 1 мкг в пятне соответственно). Результаты приведены в табл. 4.
|
|
|
После обработки пластин реактивом Драгендорфа хроматографические зоны всех четырех веществ окрашивались в оранжевый цвет. Использование реактива Драгендорфа в данной методике обусловлено универсальностью и высокой чувствительностью детектирующего реагента.
Концентрированная азотная кислота при капельном нанесении вызывала коричневое окрашивание для клозапина, бордовое — для оланзапина и позво-
Таблица 4
Пределы обнаружения в пятне клозапина, оланзапина, кветиапина, рисперидона некоторыми детекторами в методе тонкослойной хроматографии Table 4
Дата добавления: 2021-03-18; просмотров: 118; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!