Осаждение белков ТХУ часто применяют для полного удаления (осаждения) белков из биологических жидкостей.
ЦВЕТНЫЕ РЕАКЦИИ НА БЕЛКИ
Цветные реакции на белки являются качественными
реакциями, обусловленными специфическими группами −
Радикалами. Некоторые из таких реакций широко используются в
Биохимической практике для изучения структуры и
Аминокислотного состава белков, их количественного
Определения.
БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ
На обнаружение пептидных связей в белках)
Белки (пептиды) в щелочном растворе в присутствии солей
Меди (II) образуют комплексные ее соединения, окрашенные в
Сине-фиолетовый или красно-фиолетовый цвет.
Для пептидной (амидной) группы характерна лактам-
лактимная таутомерия:
В щелочной среде преобладающая лактимная (енольная)
Форма полипептида взаимодействует с медью с образованием
стабильного окрашенного комплекса:
Ход работы. К 1 мл 1% раствора белка (желатина, яичного
белка или сывороточного альбумина) добавляют 1 мл 10%
раствора щелочи (NaOH или KOH) и 1 каплю 1% раствора
Сульфата меди. Появляется сине-фиолетовое или красно-
Фиолетовое окрашивание.
НИНГИДРИНОВАЯ РЕАКЦИЯ
(на аминогруппу, находящуюся в α-положении)
Белки, полипептиды и свободные α-аминокислоты при
Нагревании реагируют с нингидрином (трикетогидринденгид-
Ратом) с образованием продукта конденсации, окрашенного в
фиолетовый цвет:
Ход работы. К 1 мл 1% раствора белка прибавляют 0,5 мл 0,5%
|
|
|
Раствора нингидрина и нагревают до кипения. Появляется
Фиолетово-синее окрашивание.
Проделывают эту реакцию с раствором аминокислоты, взяв
вместо раствора белка 1% раствор глицина. Сравнить полученные
Результаты и сделать вывод.
Необратимое осаждение белков
При необратимом осаждении белков нарушается их четвертичная, третичная и вторичная структуры, т.е. белки денатурируют. В результате денатурации белки утрачивают свои физико-химические и биологические свойства.
Денатурация белков может быть вызвана радом физических и химических факторов: повышением температуры, взаимодействием с солями тяжелых металлов, минеральными кислотами, щелочами, продолжительным воздействием органических реагентов и др. Денатурация чаще всего необратима, но в ряде случаев наблюдается ренатурация – восстановление исходной конформации молекулы белка и его свойств.
Денатурация белков при нагревании
Белки денатурируют и выпадают в осадок при нагревании их растворов выше 50-60 ◦ С. Свернувшиеся белки не могут быть снова переведены в раствор, т.к. при нагревании нарушаются связи, стабилизирующие четвертичную, третичную и вторичную структуры белковых молекул, изменяются их физико-химические свойства, также снижается и гидратационная способность.
|
|
|
В изоэлектрическом состоянии при нагревании степень денатурации увеличивается, т.к. изоэлектрическая точка для большинства белков находится в слабокислой среде, то небольшое подкисление раствора белка способствует более полной его коагуляции.
Устойчивость белковых мицелл наблюдается в сильнокислой или щелочной среде даже при кипячении, так как молекулы белка, заряжаясь одноименно, отталкиваются друг от друга.
Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
Концентрированные минеральные кислоты (Н2SO4, НСl, НNО3и др.) вызывают необратимую денатурацию белков, следствием чего является агрегация белковых молекул и их осаждение.
Денатурирующее действие минеральных кислот объясняется их воздействием на функциональные группы белка. Минеральные кислоты, например, превращают отрицательно заряженную группу –СОО - в незаряженную –СООН, что приводит к нарушению ионных связей (солевых мостиков) и, как следствие, к разворачиванию полипептидных цепей. При длительном воздействии концентрированными минеральными кислотами могут произойти гидролиз белка, а также реакции нитрования, окисления, сульфирования и т.д.
|
|
|
Осаждение белков органическими кислотами
Белки из растворов необратимо осаждаются органическими кислотами. Трихлоруксусная кислота (ТХУ) ССl3СООН и сульфосалициловая кислота С6Н3ОНСООНSО3Н являются очень чувствительными, специфическими реактивами на белок и широко применяются с этой целью.
Осаждение белков ТХУ часто применяют для полного удаления (осаждения) белков из биологических жидкостей.
Ход работы.В одну пробирку вносят 1 мл раствора белка и добавляют несколько капель 10%-ного раствора ТХУ. Выпадает осадок.
Дата добавления: 2020-11-23; просмотров: 568; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!