Определение бактерий группы кишечной палочки (БГКП).
ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ
Тема: Техника санитарно-микробиологического
Исследования молока и молочных продуктов
Исследование молока и молочных продуктов
проводят согласно НТД: ГОСТ 9225-84.
Отбор проб. Пробы для микробиологических анализов отбирают в стерильную посуду с помощью стерильных приспособлений (черпаком, ложкой, щупом, шпателем).
Молоко и сливки пастеризованные, сметана в транспортной таре.
От продукции попавшей в выборку после тщательного перемешивания стерильной шумовкой или черпаком, отбирают 50-60 см3 продукта в стерильную посуду.
Мороженое в транспортной таре.
Стерильной ложкой снимают верхний слой толщиной не менее 2,5 см, после стерильным щупом или ложкой отбирают пробу массой 40-50г.
Творог, творожные изделия, масло, сыр.
От продукции, попавшей в выборку в потребительской таре, отбирают для анализа 15-20г (включая и поверхностный слой).
От продукции, попавшей в выборку в транспортной таре, пробу отбирают стерильным щупом на расстоянии 3-5 см от края, направляя щуп к противоположной стороне и отпуская на 3/4 его длины. Из столбика продукта на щупе отбирают стерильным шпателем 15-20г, помещают в стерильную посуду. Оставшийся после отбора столбик продукта на щупе возвращают на прежнее место, а поверхность аккуратно заделывают. Поверхность сыра заливают подогретым до (110 ±10°С) парафином.
|
|
|
Сгущенные молочные консервы, сухие молочные продукты
В транспортной таре
Стерильной трубкой или черпаком отбирают на анализ 40-50г продукта.
Фасованные продукты в бутылках, пакетах отбирают выборочно по 1 – 2 образца.
Взятые образцы сопровождают документом в котором указывают: номер пробы; наименование предприятия - изготовителя; наименование и сорт продукта; номер и объем партии; дату и час выработки продукции с момента окончания технологического процесса; дату и час отбора проб; должность и подпись лица отобравшего пробу; объем необходимых анализов; обозначение НТД, по которой вырабатывался продукт.
Микробиологические анализы проводят не более, чем через 4 ч с момента отбора проб. Пробы должны храниться и транспортироваться до начала исследования при температуре не выше + 6°С, а для мороженого – не выше минус 2°С.
Подготовка проб к анализу.
1. Молоко, сливки, сметану, сухие молочные продукты тщательно перемешивают.
2. Кисломолочные напитки, продукты закваски перемешивают и нейтрализуют (в 10 см 3 продукта добавляют 1 см 3 стерильного раствора двууглекислого натрия).
3. Мороженое, масло нагревают на водяной бане при температуре 40-45°С.
4. Сыр, творог, творожные изделия тщательно растирают.
|
|
|
Готовим ряд разведений.
В колбу пипеткой вносим 10см 3 продукта и наливаем 90 см3 NaCl (1:10), во вторую пробирку переносим 1 см3 из разведения 1:10 и доливаем 9 см3 NaCl (1:100) и т.д.
Цель исследования.
1. Определение ОМЧ.
2. Определение БГКП.
Определение общего количества бактерий.
Метод основан на способности мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (МАФАМ) – ОМЧ размножаются на плотном питательном агаре в течение 72ч. Количество засеваемого продукта устанавливают с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения в соответствии с таблицей.
| Наименование продукта | Засеваемый объем или масса, см3 или г |
| Молоко и сливки сырые | 0,0001 0,00001 0,000001 |
| Молоко и сливки пастеризованные | 0,1; 0,01; 0,001. |
Из каждой пробы делают посев на 2-3 чашки из разведений, указанных в таблице. Каждое из разведений должно быть засеяно в количестве 1 см3 в одну чашку Петри и залито 10-15 см3 МПА расплавленного и охлажденного до t 40-45°С. Чашки маркируют и ставят в термостат t + 30°С на 72 ч.
Обработка результатов.
Количество выросших колоний подсчитывают на каждой чашке. При большом числе колоний, дно чашки Петри делят на 4 и более одинаковых секторов, подсчитывают число колоний на 2-3 секторах (но не менее чем на 1/3 поверхности чашки), находят среднее арифметическое число колоний и умножают на общее количество секторов всей чашки. Таким образом, находят общее количество колоний, выросших на одной чашке.
|
|
|
Общее количество бактерий в 1см3 и 1г продукта (х) в единицах вычисляют по формуле: x = n*10m,
n – количество колоний, подсчитанных на чашке Петри;
m - число десятикратных разведений.
За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое, полученное по всем чашкам.
По ГОСТу ОМЧ для пастеризованного молока 75.000, для разливного 300.000.
В кисломолочных продуктах (кефир, простокваша, творог, сметана и д.р.), содержащих обильную специфическую микрофлору (например: молочнокислые стрептококки, молочнокислые палочки, дрожжи) ОМЧ не определяют, а контролируют состав микрофлоры. Для этого из кисломолочных продуктов готовят мазки, сушат, фиксируют, окрашивают метиленовым синим, микроскопируют. В поле зрения должна находиться только специфическая микрофлора.
Определение бактерий группы кишечной палочки (БГКП).
Бродильный метод
|
|
|
В среду Кесслер производят посев в количествах указанных в таблице.
| Наименование продукта | Засеваемый объем или масса, см3 или г. | Количество пробирок со средой, засеваемых из каждых разведений |
| Молоко и сливки сырые | от 0,1 до 0,00001 | 1 |
| Молоко и сливки пастеризованные | 1; 0,1 | 3 |
| Мороженное | 0,1 | 3 |
| Масло | от 1 до 0,001 | 1 |
| Сыр | от 0,1 до 0,00001 | 1 |
| Творог, сметана | от 0,1 до 0,000001 | 1 |
Определение БГКП в пастеризованном молоке.
1 день. Посев молока производят в 6 пробирок с 5 мл среды Кесслер. В 3 пробирки засевают по 1 мл цельного молока, в другие 3 по 1 мл из разведения 1:10 (0,1мл). Посевы инкубируют при t + 37° C, 18 – 24 ч.
2 день. Просматривают пробирки с посевами и по наличию газообразований в них определяют количество БГКП. При отсутствии газообразований через 18-24 ч продукт считается не загрязненным БГКП.
Из пробирок, в которых наблюдается брожение, проводят посев петлей на среду Эндо, разделенную на 4 сектора, инкубируют при t + 37° C, 18 – 24 ч.
3 день. При отсутствии на среде Эндо колоний, типичных для БГКП, (красных с металлическим блеском, розовых, бледно-розовых), продукт считают не загрязненным БГКП. При наличии на среде Эндо колоний, типичных для БГКП, их изучают. Из изолированных колоний делают препараты, окрашивают по Грамму и микроскопируют. При обнаружении грамотрицательных палочек производят посев на среду с глюкозой инкубируют (t 43° C ) и на среду Козера (t + 37° C) 18-24ч.
4 день. Производят учет результатов. Наличие кислоты и газа на среде с глюкозой и отсутствии роста на среде Козера свидетельствует о наличии кишечной палочки (цитратотрицательной разновидности).
Изменение оливково-зеленого цвета среды Козера на васильковый свидетельствуют о том, что БГКП относятся к цитратположительным разновидностям, которые не учитывают.
Определение коли – титра
(пастеризованное молоко, сливки, кефир, кумыс, ацидофилинные напитки, простокваша, ряженка).
|
Варианты | Наличие кишечной палочки в пробирках с количеством засеянного продукта |
Колли-титр, см3 | |||||
| 1 | 1 | 1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | ||
| а | ¾ | ¾ | ¾ | ¾ | ¾ | ¾ | более 3,0 |
| б | + | ¾ | ¾ | ¾ | ¾ | ¾ | =3,0 |
| в | + | + | + | + | + | ¾ | менее 0,3 |
| + | + | ¾ | + | + | + | менее 0,3 | |
| + | + | + | + | + | + | менее 0,3 | |
| г | во всех остальных случаях | =0,3 | |||||
Примечание: знак « + » - не утилизируют цитрат (цитротрицательные); знак « - « обозначает - утилизируют цитрат (цитратположительные).
Согласно ГОСТу коли – титр для пастеризованного молока не ниже 3, для разливного молока не ниже 0,3.
Дата добавления: 2020-11-15; просмотров: 857; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!