Радиоиммунный анализ (РИТ-РИА)
⇐ ПредыдущаяСтр 3 из 3
№ | Шаги проведения | Баллы |
1 | Специфицеский антиген адсорбируют в лунках полистиролового планшета. | 25 |
2 | Инкубируют с испытуемыми сыворотками человека. | 25 |
3 | Отмывают несвязавшиеся иммуноглобулины. | 5 |
4 | Связавшиеся иммуноглобулины выявляют с помощью антиглобулиновой (человеческой) сыворотки, отмеченными радиоактивными изотопами (J 125). | 25 |
5 | При соответствии антигена и антитела образуется комплексы, количество которых устанавливается с помощью гамма или В – счетчиков. | 20 |
ИТОГО: | 100 |
РИФ прямая
№ | Шаги проведения | Баллы |
1 | При прямом методе готовится препарат, содержащий исследуемые микроорганизмы (АГ). | 15 |
2 | Фиксируют его жидким фиксатором (ацетоном). | 15 |
3 | Обрабатывают специфической люминесцирующей сывороткой (ацетон). | 15 |
4 | Отмывают избыток сыворотки. | 10 |
5 | Высушивают препарат и рассматривают в люминесцентном микроскопе. | 10 |
6 | При положительной реакции наблюдаются свечение антигена. | 10 |
7 | Это реакция позволяет за 1-2 часа обнаружить микробные антигены. | 10 |
8 | Метод прост и высокоспецифичен , но требует большого набора различных люминесцирующих сывороток. | 15 |
ИТОГО: | 100 |
РИФ непрямая
№ | Шаги проведения | Баллы |
1 | При непрямом методе готовится препарат, содержащий исследуемые микроорганизмы (АГ). | 15 |
2 | Фиксируют его жидким фиксатором. | 15 |
3 | Обрабатывают кроличьей специфической сывороткой. | 15 |
4 | Промывают препарат. | 10 |
5 | Обрабатывают люминесцирующей антиглобулиновой сывороткой против глобулинов кролика. | 10 |
6 | Снова промывают. | 10 |
7 | Высушивают препарат и рассматривают в люминесцентном микроскопе. | 10 |
8 | При положительной реакции наблюдаются свечение комплекса антиген+антитело. | 15 |
ИТОГО: | 100 |
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
|
|
№ | Шаги проведения |
1 | ПЦР – это молекулярно – биологический метод диагностики. |
2 | Суть ПЦР состоит в циклическом удвоении определенного участка ДНК с помощью специфических праймеров (затравок) особых ферментов – полимераз. |
3 | В результате увеличения ДНК образуется достаточное ее количество, чтобы можно было выявить физико-химическими методами хроматографией или электрофорезом. |
4 | Праймеры получают из известных геномов возбудителей. |
5 | Обязательным условием проведения ПЦР является знание нуклеотидной последовательности объекта исследования (бактерии, вирусов и т.д.) |
6 | Исследуемую ДНК собирают в пробирке вместе с необходимыми компонентами и прогревают |
7 | При этом комлементарные нити ДНК разъединяются. Этот этап называется денатурацией ДНК. |
8 | К образовавшимся одноцепочечным ДНК присоединяют праймеры. Этот этап называется «отжигом» (присоединением) |
9 | Фермент полимераза достраивает комплементарные цепи ДНК. Этот этап называется «элонгация» (удлинение). |
10 | Как правило, проводится 30 циклов, что позволяет получить 2і° копий участка ДНК возбудителя. |
|
|
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 111; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!