Количественное определение дрожжей и плесневых грибов
5.8.2.1. Взвесить в стерильную колбу 10 г (мл) исследуемого образца (твердый образец растереть в стерильной ступке до порошка), добавить в колбу 100 мл стерильной пептонной воды или стерильного физраствора. В случае жидкого исследуемого образца внести в колбу пипеткой 10 мл образца и добавить 90 мл стерильной пептонной воды или стерильного физраствора. Образцы с массовой долей NаСl более 5% разводить в пептонной воде, образцы мясных продуктов разводить в стерильнос физрастворе. Полученное разведение образца считать 1:10. Аналогично сделать разведения 1:100 и, при необходимости, 1:1000.
5.8.2.2. Отобрать из пробирки с наибольшим разведением 2 мл исследуемого образца и внести по 1 мл в каждую из двух чашек Петри. Добавить в чашки по 20-25 мл расплавленной и охлажденной до 40ºС каждой из сред п.п. 5.2.1.-5.2.6. и быстро перемешать, вращая чашку круговыми движениями, не отрывая от стола. Аналогично провести посев образца из меньших разведений.
5.8.2.3. После застывания агара убрать чашки для инкубирования в термостат на 24±1 ºС.
5.8.2.4. Посевы инкубировать в течение 5 суток в аэробных условиях.
5.8.2.5. Через 3 суток провести предварительный учет типичных колоний. Если в посевах на агаризованных средах присутствуют мукорные быстро растущие грибы, то снятие предварительных результатов проводить осторожно, не допуская того, чтобы споры этих грибов осыпались и дали вторичный рост. Колонии дрожжей и плесневых грибов разделить визуально.
|
|
|
- Колонии дрожжей выглядят как крупные выпуклые блестящие серовато-белые с гладкой поверхностью и ровным краем.
- Рост плесневых грибов сопровождается появлением мицелия различной окраски.
5.8.2.6. По окончании инкубации подсчитать количество колоний, выросших на чашках. для подсчета отобрать чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и от5 до 50 колоний плесневых грибов.. Определить среднее количество колоний на двух чашках и пересчитать на 1 г (мл) исследуемого образца.
5.8.2.7. При необходимости сделать мазки "раздавленная капля" и микроскопировать.
5.8.2.8. По окончании работ провести обеззараживание (дезинфекцию) лабораторной посуды, используемой при проведении испытания, и утилизацию образовавшихся отходов.
Определение Bacillus cereus
5.9.1. Навеску продукта массой 10 г развести в 90 мл физиологического раствора. (Исходные разведения продуктов с массовой долей NaCl более 5% готовят с использованием пептонной воды).
Из пробы пищевого продукта, в котором нормируется количество B.cereus, или его исходного разведения готовят ряд разведений в соответствии с допустимым количеством B.cereus, указанным в нормативно-технической документации на конкретный вид пищевого продукта. Культуральную жидкость разводят так, чтобы получить при высеве изолированные колонии.
|
|
|
5.9.2.Пробу объемом 0,1-0,2мл высевают поверхностным методом параллельно на две чашки Петри с предварительно подсушенной селективной средой(Bacillus cereus agar).
5.9.3. Посевы на чашках Петри термостатируют при 30±1 ºС в течение 24-48 часов. Через 24 часа посевы просматривают и выбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний, характерных для B.cereus. Через 48 часов уточняют число обнаруженных колоний.
5.9.4.Для подтверждения принадлежности колоний к B.cereus 5 характерных колоний отсевают на скошенный мясо-пептонный агар и термостатируют 18-24 часа при 30±1 ºС .
На скошенном мясо-пептонном агаре B.cereus образует сплошной налет белого цвета, иногда с мучнистой поверхностью.
Со скошенного агара готовят препараты, окрашивают по Граму, а также определяют подвижность клеток методом висячей капли. B.cereus это крупные грамположительные палочки со слегка закругленными концами, лежащими в виде цепочек. B.cereus образует субтерминальные или центральные споры. В висячей капле клетки подвижны.
5.9.5.Для доказательства анаэробной ферментации глюкозы культуру высевают уколом в питательную среду с бромкрезоловым пурпурным и глюкозой. Посевы инкубируют при при 30±1 ºС .в течение 24 часов. Среда окрашивается в желтый или желто-коричневый цвет по всей длине укола.
|
|
|
5.9.6. Для определения способности ферментации маннита культуру высевают в питательную среду с бромкрезоловым пурпурным и маннитом. Посевы инкубируют при при 30±1 ºС .в течение 24 часов. Среда цвет не изменяет.
5.9.7. Определяют образование ацетилметилкарбинола на пептонной воде с глюкозой. Посевы инкубируют при при 30±1 ºС .в течение 24 часов. Затем добавляют реактивы: к 1мл культуры 0,2 мл раствора гидроокиси калия и 0,6мл α-нафтола. Содержимое пробирки встряхивают, а затем оставляют на 1 час при комнатной температуре. B.cereus образует ацетилметилкарбинол.
5.9.8. Изучают редукцию нитратов. Реакция должна быть положительной.
Результаты испытаний пересчитывают на 1г или 1 мл продукта.
5.9.9. Обработка результатов.
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно. Если обнаружены подвижные грамположительные, нитратредуцирующие, спорообразующие палочки, способные образовывать ацетилметилкарбинол, ферментировать в анаэробных условиях глюкозу, не способные ферментировать манит, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к B.cereus. Если в 80% случаев подтвержден рост B.cereus, то считают, что все характерные колонии принадлежат к B.cereus. В остальных случаях количество B.cereus определяют, исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для изучения морфологических и биохимических свойств.
|
|
|
6. Правила охраны труда
6.1. К работе допускаются лица, не моложе 18 лет, прошедшие обучение данной процедуре и работе со спиртовкой.
6.2. Все работы проводить в микробиологическом боксе.
7. Ответственность
7.1. Лаборант-бактериолог несет ответственность за подготовку лабораторной посуды, приготовление питательных сред и растворов, окрашивание мазков.
7.2. Врач-бактериолог несет ответственность за выполнение основного хода работ по данной СОП, микроскопирование мазков.
7.3. Контроль за соблюдением требований данной СОП осуществляет заведующая бактериологической лабораторией или врач-бактериолог.
7.4. Заведующая бактериологической лабораторией несет ответственность за соблюдение правил техники безопасности, а также за достаточность и полноту принятых на рабочем месте защитных мер, обеспечивающих безопасность исполнителей данной СОП.
ЛИСТ РАССЫЛКИ
СОП 01-01-2016
______________________________________
(Обозначение и наименование документа)
| Должность | Фамилия, инициалы | Дата получения | № экз. | подпись |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
ЛИСТ ОЗНАКОМЛЕНИЯ
СОП 01-01-2016
| (Обозначение и наименование документа) |
(Наименование структурного подразделения)
| Дата ознакомления
| Лицо, ознакомленное с документом | ||
| ФИО | Должность | Подпись | |
Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 189; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!